| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一部分 日本血吸虫早期诊断方法的建立 | 第14-81页 |
| 第一章 前言 | 第14-35页 |
| ·流行病学 | 第14-16页 |
| ·日本血吸虫的生活史以及引起的临床症状 | 第16-17页 |
| ·日本血吸虫的基因组与性别 | 第17-18页 |
| ·日本血吸虫病的防治方法 | 第18-19页 |
| ·日本血吸虫的检测方法 | 第19-22页 |
| ·病原学方法 | 第19-20页 |
| ·免疫学诊断方法 | 第20-21页 |
| ·生物芯片技术 | 第21页 |
| ·核酸扩增法 | 第21-22页 |
| ·日本血吸虫的诊断技术最新进展-荧光定量PCR技术 | 第22-33页 |
| ·荧光定量PCR技术基本原理 | 第23-25页 |
| ·荧光染料法和荧光探针法 | 第25-33页 |
| ·荧光染料染色法 | 第25-27页 |
| ·TaqMan荧光探针 | 第27-29页 |
| ·分子信标 | 第29-30页 |
| ·荧光谐振能量传递(FRET)探针 | 第30-31页 |
| ·LUX Primers | 第31-32页 |
| ·各种荧光探针和荧光染料的比较 | 第32-33页 |
| ·荧光定量PCR技术在血吸虫诊断中的应用 | 第33页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第33-35页 |
| 第二章 TAQMAN荧光定量方法的建立及初步应用 | 第35-61页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·菌株和裂体吸虫 | 第35页 |
| ·主要实验仪器 | 第35-36页 |
| ·主要耗材和试剂 | 第36-37页 |
| ·主要试剂的配制 | 第37页 |
| ·临床标本来源 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-51页 |
| ·样本处理及DNA提取 | 第37-38页 |
| ·引物序列的设计和TaqMan荧光探针的设计 | 第38-45页 |
| ·常规PCR及PCR产物克隆 | 第45-50页 |
| ·常规PCR及凝胶电泳检测 | 第45页 |
| ·PCR产物的回收 | 第45-46页 |
| ·PCR产物连接T载体 | 第46-48页 |
| ·感受态的制备与转化 | 第48页 |
| ·单克隆菌落的筛选 | 第48-49页 |
| ·质粒的抽提 | 第49-50页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第50页 |
| ·实时荧光定量PCR方法的建立 | 第50-51页 |
| ·实验结果 | 第51-58页 |
| ·常规PCR产物检测和测序 | 第51-55页 |
| ·荧光定量方法的特异性 | 第55-56页 |
| ·荧光定量方法的标准曲线和灵敏度 | 第56-57页 |
| ·荧光定量PCR的Ct值的可重复性和稳定性 | 第57-58页 |
| ·临床应用与方法评价 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-61页 |
| 第三章 血吸虫早期诊断模型的建立 | 第61-78页 |
| ·引言 | 第61-62页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·实验动物和细胞系 | 第62页 |
| ·单性别尾蚴的挑选 | 第62页 |
| ·主要实验仪器 | 第62页 |
| ·主要耗材和试剂 | 第62-63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·尾蚴攻击感染 | 第63页 |
| ·样本的收集和处理 | 第63-64页 |
| ·DNA的提取 | 第64页 |
| ·RNA的提取和逆转录 | 第64-65页 |
| ·实时荧光定量PCR方法的建立 | 第65页 |
| ·胶体金免疫层析法的建立 | 第65-67页 |
| ·胶体金免疫层析法的原理 | 第65-66页 |
| ·胶体金免疫层析法检测日本血吸虫试纸条的组装 | 第66-67页 |
| ·胶体金免疫层析法对血清的检测 | 第67页 |
| ·DNA体内代谢实验 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-75页 |
| ·计算虫荷 | 第67-68页 |
| ·实时TaqMan荧光定量方法的标准曲线 | 第68-72页 |
| ·荧光定量方法的标准曲线以及灵敏度 | 第68-70页 |
| ·荧光定量方法的重复度和稳定性 | 第70页 |
| ·荧光定量方法检测动物样本 | 第70-72页 |
| ·荧光定量方法的在体内检测的应用 | 第72-74页 |
| ·荧光定量方法与镜检法的比较 | 第72页 |
| ·荧光定量方法与GICA法的比较 | 第72-74页 |
| ·日本血吸虫DNA在体内的代谢 | 第74-75页 |
| ·讨论 | 第75-78页 |
| 第四章 总结、创新与展望 | 第78-81页 |
| 第二部分 白介素22小鼠转基因模型的建立 | 第81-115页 |
| 第五章 前言 | 第81-92页 |
| ·转基因动物研究及应用 | 第81-85页 |
| ·Tet-off/on & TRE-tight质粒系统简介 | 第85-86页 |
| ·白介素22简介 | 第86-89页 |
| ·白介素22转基因小鼠研究进展 | 第89-90页 |
| ·本项研究的目的和意义 | 第90-92页 |
| 第六章 白介素22诱导性表达转基因小鼠的建立 | 第92-114页 |
| ·引言 | 第92-93页 |
| ·材料 | 第93-96页 |
| ·主要实验仪器 | 第93页 |
| ·主要耗材和试剂 | 第93-94页 |
| ·主要试剂的配制 | 第94-95页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第95页 |
| ·实验动物 | 第95-96页 |
| ·方法 | 第96-106页 |
| ·引物序列的设计 | 第96页 |
| ·常规PCR及PCR产物克隆 | 第96-101页 |
| ·常规PCR及凝胶电泳检测 | 第96-97页 |
| ·PCR产物的回收 | 第97页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第97-98页 |
| ·PCR产物连接表达载体 | 第98-99页 |
| ·感受态的转化与单克隆菌落的筛选 | 第99页 |
| ·质粒的抽提 | 第99-100页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第100-101页 |
| ·质粒DNA大量抽提、纯化 | 第101-102页 |
| ·人肺癌A549细胞株复苏培养及转染 | 第102-104页 |
| ·细胞的复苏、培养、冻存 | 第102-103页 |
| ·细胞转染 | 第103-104页 |
| ·ELISA的检测 | 第104页 |
| ·重组质粒DNA的扩增、显微注射片段的纯化 | 第104-105页 |
| ·重组质粒的的大量扩增以及纯化 | 第104-105页 |
| ·基因注射片段的回收和纯化 | 第105页 |
| ·受精卵的采集和显微注射 | 第105页 |
| ·转基因小鼠的PCR鉴定 | 第105-106页 |
| ·小鼠组织DNA提取 | 第105页 |
| ·转基因小鼠的PCR鉴定 | 第105-106页 |
| ·小鼠的传代 | 第106页 |
| ·小鼠体内表达的检测 | 第106页 |
| ·实验结果 | 第106-112页 |
| ·重组质粒酶切结果 | 第106-107页 |
| ·重组质粒的测序结果 | 第107页 |
| ·绿色荧光蛋白的检测 | 第107-108页 |
| ·细胞上清液白介素22的检测 | 第108-109页 |
| ·线性化基因注射片段的制备 | 第109-110页 |
| ·转基因小鼠PCR鉴定电泳图 | 第110-111页 |
| ·体内检测转基因小鼠表达 | 第111-112页 |
| ·讨论 | 第112-114页 |
| 第七章 总结 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-120页 |
| 攻博期间发表和待发表的论文 | 第120-122页 |
| 攻博期间获得/受理的专利 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |