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小麦木聚糖酶抑制蛋白基因的克隆与表达

致谢第1-7页
摘要第7-8页
1 文献综述第8-18页
   ·木聚糖酶研究第8-11页
     ·木聚糖第8页
     ·木聚糖酶概述第8-9页
     ·木聚糖酶的分类第9页
     ·木聚糖酶的应用第9-11页
   ·木聚糖酶抑制蛋白第11-15页
     ·TAXI 型抑制蛋白第12-14页
     ·XIP 型抑制蛋白第14-15页
     ·TLXI 型抑制蛋白第15页
   ·木聚糖酶抑制蛋白的研究意义第15-18页
     ·木聚糖酶抑制蛋白对小麦食品加工过程的影响第15-16页
     ·木聚糖酶抑制蛋白在饲料行业的作用及研究意义第16页
     ·木聚糖酶抑制蛋白在植物防御反应中的作用及研究意义第16-18页
2 引言第18-19页
3 材料与方法第19-29页
   ·材料第19-20页
     ·小麦品种第19页
     ·菌株和载体第19页
     ·试剂与药品第19页
     ·培养基第19-20页
     ·仪器设备第20页
   ·有关试验的操作流程第20-22页
     ·小麦叶、幼嫩籽粒中粗蛋白提取第20-21页
     ·小麦木聚糖酶抑制蛋白基因xip-hn 的克隆第21页
     ·小麦木聚糖酶抑制蛋白基因在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质分析第21-22页
     ·小麦木聚糖酶抑制蛋白基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质分析第22页
   ·试验方法第22-29页
     ·小麦叶和籽粒中粗蛋白提取第22-23页
     ·小麦叶和籽粒中木聚糖酶活性的测定第23页
     ·木聚糖酶指示酶液的制备第23-24页
     ·总RNA 的提取第24页
     ·RT-PCR第24-26页
     ·重组载体的构建第26页
     ·大肠杆菌阳性转化子的获得第26-27页
     ·目的基因在大肠杆菌中的表达检测第27页
     ·毕赤酵母感受态细胞的制备第27页
     ·毕赤酵母细胞的电击转化第27-28页
     ·转化子表型鉴定第28页
     ·G418 压力筛选高拷贝转化子第28页
     ·目的基因在毕赤酵母中的表达检测第28-29页
4 结果与分析第29-39页
   ·小麦不同生育期木聚糖酶抑制活性及木聚糖酶活性的变化第29-30页
     ·小麦不同生育期叶和籽粒中木聚糖酶抑制活性的变化第29页
     ·小麦不同生育期叶和籽粒中木聚糖酶活性的变化第29-30页
   ·木聚糖酶抑制蛋白基因的克隆第30-35页
     ·小麦幼胚总RNA第30-31页
     ·RT-PCR 扩增xip-hn 基因第31页
     ·xip-hn 基因的TA 克隆及序列分析第31-35页
   ·木聚糖酶抑制蛋白基因的原核表达第35-37页
     ·pET21a-xip-hn 重组载体的构建第35-36页
     ·pET21a-xip-hn 表达产物检测结果第36-37页
   ·木聚糖酶抑制蛋白基因的真核表达第37页
     ·pPIC9K-xip-hn 重组载体的构建第37页
     ·pPIC9K-xip-hn 转化毕赤酵母G5115第37页
   ·xip 基因的稀有密码子分析第37-39页
5 结论与讨论第39-41页
   ·小麦不同生育期叶和籽粒中的木聚糖酶抑制活性第39页
   ·XIP-HN 基因的功能证实第39-41页
     ·XIP-HN 基因的功能证实第39页
     ·通过外源表达证明其功能第39-40页
     ·XIP-HN 基因在大肠杆菌和毕赤酵母表达策略第40-41页
参考文献第41-45页
ABSTRACT第45页

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