| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第12-14页 |
| 第一部分 实验研究 | 第14-74页 |
| 第一章 克隆亚麻FAD3B基因及构建具有不同启动子的过表达载体 | 第14-34页 |
| 摘要 | 第14-15页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·方法 | 第16-24页 |
| ·亚麻RNA提取 | 第16页 |
| ·合成cDNA及内参基因检测 | 第16-18页 |
| ·FAD3B基因的引物设计 | 第18页 |
| ·克隆FAD3B基因和序列分析 | 第18-19页 |
| ·pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B表达载体构建 | 第19-20页 |
| ·pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B表达载体构建 | 第20-23页 |
| ·PCR和酶切鉴定两个具有不同启动子的表达载体 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·亚麻RNA和cDNA质量鉴定 | 第24页 |
| ·克隆FAD3B基因及验证 | 第24-27页 |
| ·载体构建过程中片段测序结果 | 第27-29页 |
| ·两个具有不同启动子的表达载体 | 第29页 |
| ·PCR和酶切鉴定两个具有不同启动子的表达载体 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 参考文献 | 第32-34页 |
| 第二章 FAD3B转基因载体的细胞、胚胎及转基因小鼠的验证 | 第34-55页 |
| 摘要 | 第34-35页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·方法 | 第36-42页 |
| ·脂质体法转染牛胎儿成纤维细胞 | 第36-37页 |
| ·检测转染效率与转基因细胞生长活性 | 第37页 |
| ·转基因细胞RT-PCR检测 | 第37-38页 |
| ·FAD3B基因定量引物及其标准曲线 | 第38页 |
| ·绝对定量PCR检测FAD3B基因的表达水平 | 第38-39页 |
| ·制备转基因克隆牛胚胎 | 第39-40页 |
| ·转基因克隆牛胚胎的转基因检测 | 第40页 |
| ·小鼠原核注射 | 第40页 |
| ·制备鼠尾基因组 | 第40-41页 |
| ·转基因小鼠PCR检测 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-50页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞转染效率 | 第42-43页 |
| ·转基因细胞及其生长曲线 | 第43-44页 |
| ·转基因细胞RT-PCR检测 | 第44-45页 |
| ·预PCR和溶解曲线证明定量引物特异性以及制作标准曲线 | 第45-46页 |
| ·绝对定量PCR检测转基因细胞中FAD3B基因的表达水平 | 第46-47页 |
| ·转基因克隆胚胎的发育和FAD3B基因的表达 | 第47-49页 |
| ·原核注射出生的小鼠统计 | 第49页 |
| ·转基因小鼠基因组的检测 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 第三章 牛转基因细胞中内参基因稳定性和候选内源基因的表达差异 | 第55-73页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-61页 |
| ·内参基因的选择 | 第56-57页 |
| ·候选内源基因的选择 | 第57-59页 |
| ·定量引物的设计 | 第59-60页 |
| ·引物扩增效率 | 第60页 |
| ·SYBR荧光实时定量PCR | 第60页 |
| ·数据分析 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-66页 |
| ·预PCR检测内参基因定量引物 | 第61-62页 |
| ·内参基因的标准曲线及溶解曲线 | 第62-63页 |
| ·评价候选内参基因的稳定性 | 第63-64页 |
| ·候选内源基因引物的特异性检测 | 第64-65页 |
| ·候选功能基因的表达差异 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 全文小结 | 第73-74页 |
| 第二部分 文献综述 | 第74-92页 |
| 第一章 ω-3脂肪酸去饱和酶基因制备转基因动物的研究进展 | 第74-81页 |
| ·多不饱和脂肪酸的分类 | 第74-75页 |
| ·多不饱和脂肪酸的生理功能 | 第75-77页 |
| ·不同物种中ω-6和ω-3 PUFA的合成 | 第77-79页 |
| ·线虫fat-1基因通过转基因技术合成多不饱和脂肪酸 | 第79页 |
| ·植物和菌类的脂肪酸去饱和酶基因通过转基因技术合成多不饱和脂肪酸 | 第79-81页 |
| 第二章 哺乳动物基因表达研究中内参基因的选择 | 第81-85页 |
| ·实时定量RT-PCR(quantitative real-time RT-PCR)及其优点 | 第81-82页 |
| ·内参基因的作用及应具备的条件 | 第82页 |
| ·常用内参基因的缺陷 | 第82-83页 |
| ·哺乳动物中内参基因的选择的研究进展 | 第83-84页 |
| ·内参基因稳定性的分析方法 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第93页 |
