| 目录 | 第1-8页 |
| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一部：CD133在人直结肠癌细胞体外增殖和侵袭中的作用及机制 | 第16-60页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 实验材料 | 第19-24页 |
| 一、细胞系 | 第19页 |
| 二、抗体 | 第19-20页 |
| 三、培养基及主要试剂 | 第20-21页 |
| 四、质粒 | 第21页 |
| 五、菌株 | 第21页 |
| 六、主要耗材 | 第21-22页 |
| 七、主要储备液及工作液的配制 | 第22-23页 |
| 八、主要仪器 | 第23-24页 |
| 实验方法 | 第24-37页 |
| 一、细胞培养 | 第24页 |
| 二、细胞总蛋白的提取 | 第24-25页 |
| 三、BCA法检测蛋白浓度 | 第25页 |
| 四、Real Time RT-PCR | 第25-28页 |
| 五、Western Blotting | 第28-29页 |
| 六、流式细胞仪分析 | 第29-30页 |
| 七、流式细胞仪分选 | 第30页 |
| 八、质粒转化、扩增 | 第30页 |
| 九、免疫磁珠细胞分选(MACS) | 第30-31页 |
| 十、质粒大量提取 | 第31-32页 |
| 十一、慢病毒包装 | 第32-33页 |
| 十二、慢病毒感染目的细胞及稳定细胞株筛选 | 第33页 |
| 十三、MTT法检测细胞增殖 | 第33页 |
| 十四、细胞集落形成率测定 | 第33-34页 |
| 十五、Transwell体外侵袭实验 | 第34-35页 |
| 十六、siRNA干扰CD133或TIMP2的表达 | 第35页 |
| 十七、明胶酶谱法(Zymography) | 第35-36页 |
| 十八、统计学方法 | 第36-37页 |
| 实验结果 | 第37-55页 |
| 一、CD133在6种直结肠癌细胞系中的表达 | 第37-38页 |
| (一)、Flow Cytometry检测CD133在6种直结肠癌细胞系中的表达 | 第37-38页 |
| (二)、Western blotting检测CD133在6种人直结肠癌细胞系的表达 | 第38页 |
| 二、CD133~(+/high)和CD133~- HCT116细胞、CD133~+和CD133~- COLO320DM细胞的体外生物学特点 | 第38-42页 |
| (一)、FACS分选CD133~(+/high) HCT116和CD133~- HCT116细胞及纯度检测 | 第38-39页 |
| (二)、MACS分选CD133~+ HCT116和CD133~- HCT116细胞及纯度检测 | 第39-40页 |
| (三)、CD133~+ COLO320DM和CD133~- COLO320DM细胞的分选 | 第40页 |
| (四)、CD133~(+/high)和CD133~- 的HCT116和COLO320DM细胞的体外生长差别 | 第40-41页 |
| (五)、CD133~(+/high)HCT116和CD133~- HCT116细胞集落形成的差别 | 第41页 |
| (六)、CD133~(+/high)和CD133~-的HCT116体外侵袭能力 | 第41-42页 |
| 三、荧光标记的混群细胞检测CD133~+细胞在肿瘤增殖中的作用 | 第42-46页 |
| (一)、荧光标记的COLO320DM细胞的建立 | 第42-43页 |
| (二)、荧光标记细胞生物学特性的检测 | 第43-44页 |
| (三)、群体中CD133~+细胞在肿瘤增殖中的作用 | 第44-46页 |
| 四、siRNA下调CD133表达对HCT116细胞体外增殖及侵袭能力的影响 | 第46-48页 |
| (一)、siRNA可有效下调HCT116细胞中CD133的表达 | 第46-47页 |
| (二)、siRNA下调CD133对HCT116细胞体外增殖没有影响 | 第47页 |
| (三)、siRNA下调CD133降低了HCT116细胞的体外侵袭能力 | 第47-48页 |
| 五、增殖侵袭相关信号通路的检测——TIMP2在C1333~(+/-)HCT116、CD133NCsi/CD133si-HCT116细胞的表达 | 第48-50页 |
| (一)、增殖、侵袭和运动相关信号通路的检测 | 第48-49页 |
| (二)、CD133 siRNA下调HCT116细胞CD133表达后,TIMP-2蛋白水平的表达下调 | 第49-50页 |
| (三)、TIMP-2在CD133~(+/high)和CD133~- HCT116的表达 | 第50页 |
| 六、siRNA下调TIMP-2对HCT116细胞CD133表达和体外生物学特性的影响 | 第50-53页 |
| (一)、筛选有效干扰TIMP-2表达的siRNA | 第50-51页 |
| (二)、TIMP-2下调对CD133表达的影响 | 第51-52页 |
| (三)、TIMP-2下调对HCT116体外增殖能力的影响 | 第52-53页 |
| (四)、TIMP-2下调对HCT116体外侵袭能力的影响 | 第53页 |
| 七、HCT116细胞中MMP2的表达和MEK/ERK信号通路的激活 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-60页 |
| CD133在直结肠癌细胞系中的表达 | 第55-56页 |
| 在群体中CD133+细胞(干细胞)对扩群的作用 | 第56页 |
| CD133在HCT116细胞侵袭中的作用 | 第56-57页 |
| CD133+结肠癌HCT116细胞中与侵袭相关的机制 | 第57-58页 |
| MMP2和MEK/ERK信号通路与HCT116体外侵袭能力的关系 | 第58页 |
| 本研究的意义及有待完善之处 | 第58-59页 |
| 总结 | 第59-60页 |
| 第二部分：外源绿色荧光蛋白表达对肿瘤细体外生物学行为的影响 | 第60-72页 |
| 引言 | 第60-61页 |
| 实验材料 | 第61-62页 |
| 一、细胞系 | 第61页 |
| 二、菌株 | 第61页 |
| 三、质粒 | 第61页 |
| 四、培养基、主要试剂及耗材 | 第61-62页 |
| 五、主要储备液及工作液的配制 | 第62页 |
| 六、主要仪器 | 第62页 |
| 实验方法 | 第62-67页 |
| 一、细胞培养 | 第62-63页 |
| (一)、细胞传代 | 第62-63页 |
| (二)、细胞冻存与复苏 | 第63页 |
| 二、质粒转化、扩增 | 第63页 |
| 三、质粒大量提取 | 第63页 |
| 四、慢病毒包装 | 第63页 |
| 五、慢病毒感染目的细胞及稳定细胞株筛选 | 第63-64页 |
| 六、质粒转染HCT116细胞及稳定细胞克隆 | 第64页 |
| 七、MTT法检测细胞体外增殖 | 第64-65页 |
| 八、Transwell体外侵袭实验 | 第65-66页 |
| 九、细胞分析计数仪(CasyTT型)检测细胞大小和分布状况 | 第66页 |
| 十、统计学分析 | 第66-67页 |
| 实验结果 | 第67-71页 |
| 一、稳定表达外源绿色荧光蛋白的细胞系的建立 | 第67页 |
| 二、外源绿色荧光蛋白表达对细胞的体外增殖能力的影响 | 第67-69页 |
| 三、外源绿色荧光蛋白表达对细胞大小的影响 | 第69页 |
| 四、外源绿色荧光蛋白表达对细胞体外侵袭能力的影响 | 第69-71页 |
| 讨论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-83页 |
| 文献综述 CD133分子在人肿瘤中的表达及作用 | 第83-102页 |
| 一、CD133分子简述 | 第83-86页 |
| (一) CD133分子的发现及结构 | 第83-84页 |
| (二) CD133的亚细胞定位 | 第84-85页 |
| (三) CD133在正常组织中的表达 | 第85-86页 |
| 二、CD133分子在肿瘤中的作用及相关信号通路 | 第86-88页 |
| (一) CD133作为肿瘤干细胞标记的作用 | 第86-87页 |
| (二) CD133在肿瘤细胞中的表达及功能作用 | 第87-88页 |
| 三、CD133分子的调节及肿瘤干细胞相关的分子通路 | 第88-92页 |
| (一) 对CD133分子表达的调节 | 第88-90页 |
| (二) CD133相关的分子通路 | 第90-91页 |
| (三) CD133调节的信号通路 | 第91-92页 |
| 四、问题与展望 | 第92-95页 |
| (一) 问题 | 第92-94页 |
| (二) 展望 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-102页 |
| 附录：已发表文章 | 第102-104页 |
| 致谢 | 第104-106页 |
| 个人简历 | 第106-107页 |
