| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 综述部分 | 第8-24页 |
| 第一章：大肠杆菌耐药性分子机制的研究进展 | 第8-18页 |
| 第二章：喹诺酮类药物耐药性的分子机制 | 第18-24页 |
| 研究部分 | 第24-62页 |
| 第三章:荧光定量 PCR 检测 O157:H7 型大肠杆菌方法的建立 | 第24-32页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要实验仪器 | 第24页 |
| ·菌株及血清 | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·菌落计数单位的测定 | 第25页 |
| ·染色体DNA 提取 | 第25-27页 |
| ·临床分离株的分离及血清型检测 | 第27页 |
| ·普通PCR 鉴定临床分离大肠杆菌 | 第27页 |
| ·荧光定量标准曲线制定 | 第27页 |
| ·荧光定量敏感性及特异性检测 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| ·CFU 和染色体 DNA 测定结果 | 第27-28页 |
| ·动物源致病性大肠杆菌临床分离株的检测结果 | 第28页 |
| ·标准曲线制备 | 第28-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 临床分离多重耐药大肠杆菌O157acrA、acrB 基因mRNA 水平的定量测定 | 第32-54页 |
| 1 材料 | 第32-34页 |
| ·菌株及克隆载体 | 第32页 |
| ·引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| ·酶与试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-40页 |
| ·AcrA、AcrB 基因的获取 | 第34页 |
| ·大肠杆菌染色体DNA 的提取 | 第34页 |
| ·acrA、acrB 基因目的片段的PCR 扩增 | 第34页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第34页 |
| ·PCR 产物的回收 | 第34页 |
| ·acrA、acrB 基因片段的克隆 | 第34-37页 |
| ·目的基因片段与载体的连接 | 第34-35页 |
| ·JM109 感受态菌的制备 | 第35页 |
| ·重组质粒的转化 | 第35页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第35页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第35-37页 |
| ·内参的合成 | 第37页 |
| ·mRNA 的检测 | 第37-40页 |
| ·总RNA 的提取 | 第37-39页 |
| ·菌体总RNA 的反转录 | 第39页 |
| ·PCR 扩增反转录产物 | 第39页 |
| ·对15 株大肠杆菌的acrA、acrB 的mRNA 水平定量 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-51页 |
| ·大肠杆菌ATCC25922 基因组的提取 | 第40页 |
| ·大肠杆菌ATCC25922 acrA、acrB 基因片段的PCR 扩增 | 第40-41页 |
| ·PCR 产物的克隆及阳性克隆的筛选 | 第41-43页 |
| ·克隆质粒的序列分析 | 第43-44页 |
| ·acrA 基因序列测序 | 第43页 |
| ·acrB 基因序列测序 | 第43-44页 |
| ·acrA、acrB 内参的合成 | 第44页 |
| ·对15 株大肠杆菌的acrA、acrB 的mRNA 水平进行定量 | 第44-51页 |
| ·菌体总RNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·RT-PCR | 第45-46页 |
| ·对15 株大肠杆菌的acrA、acrB 的mRNA 水平进行定量 | 第46-51页 |
| ·多重耐药株acrA、acrB 的mRNA 相对水平与大肠杆菌ATCC25922 的比较 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| ·定量RT-PCR 内标准的建立 | 第51-52页 |
| ·反转录的引物的选择 | 第52页 |
| ·acrA、acrB 的mRNA 表达水平与大肠杆菌对喹诺酮类药物耐药水平的相关性 | 第52-53页 |
| ·acrA、acrB 的mRNA 的相对表达水平的一致性 | 第53-54页 |
| 第五章 大肠杆菌氟喹诺酮类药物耐药机制的研究 | 第54-62页 |
| 1 材料与方法 | 第54-58页 |
| 2 结果 | 第58-60页 |
| ·抗菌药物敏感试验结果 | 第58页 |
| ·PCR 结果 | 第58-59页 |
| ·重组质粒双酶切电泳结果 | 第59-60页 |
| ·基因突变结果 | 第60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 个人简介 | 第75-76页 |
| 导师简介 | 第76-77页 |
