| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·食物过敏 | 第13页 |
| ·食物过敏反应的种类及机理 | 第13-14页 |
| ·国内外研究现状 | 第14-19页 |
| ·流行病学调查 | 第14-15页 |
| ·水产品中存在的过敏原 | 第15-16页 |
| ·小清蛋白(Parvalbumin) | 第15页 |
| ·原肌球蛋白(Tropomyosin) | 第15-16页 |
| ·精氨酸激酶(Arginine kinase) | 第16页 |
| ·过敏原诊断及检测方法 | 第16-17页 |
| ·过敏原脱敏方法 | 第17页 |
| ·目前面临的问题 | 第17-18页 |
| ·过敏原基因的克隆 | 第18-19页 |
| ·氨基酸测序与分子克隆相结合 | 第18页 |
| ·同源序列法 | 第18页 |
| ·生物信息学方法 | 第18-19页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第19页 |
| ·主要研究内容及目标 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-36页 |
| ·实验材料 | 第21-26页 |
| ·动物 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21-23页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第23-24页 |
| ·SDS-PAGE 所用溶液 | 第23页 |
| ·Western blot 蛋白质印迹试验所用溶液 | 第23-24页 |
| ·质粒提取用溶液 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第24页 |
| ·琼脂糖电泳所用溶液 | 第24页 |
| ·GST 融合蛋白纯化所用溶液 | 第24页 |
| ·仪器 | 第24-26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·粗提物制备 | 第26页 |
| ·SDS-PAGE | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE 胶的制备 | 第26-27页 |
| ·样品SDS-PAGE | 第27页 |
| ·Western blot 分析 | 第27-28页 |
| ·肌原纤维的制备 | 第28页 |
| ·主要过敏原的纯化 | 第28-29页 |
| ·丙酮粉的制备（肌原纤维部分） | 第28页 |
| ·蟹类过敏蛋白的抽提 | 第28页 |
| ·等电点沉淀 | 第28-29页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第29页 |
| ·加热 | 第29页 |
| ·抗体制备及纯化 | 第29-30页 |
| ·抗血清制备 | 第29页 |
| ·血清滴度的确定 | 第29页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第29-30页 |
| ·不同水产品粗提物的制备及检测 | 第30页 |
| ·基因克隆及序列分析 | 第30-33页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·蟹类组织总RNA 的提取 | 第30页 |
| ·反转录合成cDNA 第一链 | 第30-31页 |
| ·PCR 扩增基因片段 | 第31-32页 |
| ·PCR 扩增产物的电泳检测及目的基因片段的回收 | 第32页 |
| ·基因片段与pBS-T 载体的连接 | 第32页 |
| ·CaCl_2 法制备感受态细胞 | 第32页 |
| ·连接产物的转化及重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·核苷酸序列的测定及分析 | 第33页 |
| ·TM 的原核表达及纯化 | 第33-36页 |
| ·表达载体pGEX-4T-3 质粒的提取 | 第33页 |
| ·表达载体及TM DNA 的酶切消化 | 第33-34页 |
| ·表达载体与TM DNA 的连接，转化及重组表达质粒的鉴定 | 第34页 |
| ·GST-TM 的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·表达产物的电泳检测及分析 | 第35页 |
| ·重组蛋白GST-TM 的亲和纯化 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与分析 | 第36-60页 |
| ·中华绒螯蟹过敏组分的分析与鉴定 | 第36-40页 |
| ·粗提物组分的分析 | 第36页 |
| ·中华绒鳌蟹粗提液过敏蛋白的检测 | 第36-38页 |
| ·中华绒螯蟹肌肉加热前后的差异 | 第38-40页 |
| ·中华绒螯蟹主要过敏原的纯化 | 第40-42页 |
| ·丙酮粉制备及盐溶结果 | 第40页 |
| ·等电点沉淀 | 第40页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第40-41页 |
| ·加热处理 | 第41-42页 |
| ·中华绒螯蟹主要过敏原的抗体制备 | 第42-43页 |
| ·不同水产品粗提物的制备及检测 | 第43-46页 |
| ·基因克隆、序列测定与分析 | 第46-51页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒的PCR 验证 | 第47-48页 |
| ·TM 序列的测定与分析 | 第48-51页 |
| ·TM 的原核表达与纯化 | 第51-60页 |
| ·表达质粒的构建与鉴定 | 第51-53页 |
| ·GST-TM 的诱导表达 | 第53-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-66页 |
| ·主要过敏原检测、纯化及抗体制备 | 第60-61页 |
| ·原肌球蛋白的克隆与表达 | 第61-64页 |
| ·结论 | 第64-65页 |
| ·研究展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第71页 |