| 提要 | 第1-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-22页 |
| ·蛋白质分子设计 | 第7-11页 |
| ·基于天然蛋白质分子的合理设计 | 第7-9页 |
| ·全新的蛋白质分子设计 | 第9-11页 |
| ·嗜热酶简介 | 第11-12页 |
| ·α/β水解酶超家族 | 第12-19页 |
| ·嗜热酰基氨肽酶APE1547 | 第15-17页 |
| ·嗜热酯酶AFEST | 第17-19页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第19-20页 |
| ·立题依据和试验设计 | 第20-22页 |
| 第二章 嵌合酶的分子设计和动力学模拟 | 第22-31页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·嵌合酶AAM6 模型的建立 | 第22-27页 |
| ·APE1547 结构比对和结构域间区域相互作用分析 | 第22-24页 |
| ·用Modeller 建立重组蛋白的模型分子AA | 第24-25页 |
| ·利用SCHEMA 与LPC/CSU 寻找待突变残基，建立模型AAM6 | 第25-27页 |
| ·嵌合酶AAM6 模型的评价 | 第27-28页 |
| ·PROCHECK | 第27-28页 |
| ·PROFILE | 第28页 |
| ·嵌合酶AAM6 与不同碳链长度底物的DOCK 结果及Ludi 测评 | 第28-29页 |
| ·AAM6-His-tag 的分子动力学结果 | 第29-31页 |
| 第三章 嵌合酶的构建、可溶性表达、性质研究及结果讨论 | 第31-60页 |
| ·引言 | 第31页 |
| ·实验材料 | 第31-38页 |
| ·菌种 | 第31页 |
| ·质粒 | 第31-32页 |
| ·主要试剂 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·培养基 | 第34-38页 |
| ·实验方法 | 第38-49页 |
| ·嵌合酶基因AA 的制备 | 第38-43页 |
| ·嵌合酶突变体基因AAM6 的制备 | 第43-45页 |
| ·嵌合酶AAM6 的复性实验 | 第45页 |
| ·优化后嵌合酶AAM6 的表达、纯化条件 | 第45-46页 |
| ·嵌合酶AAM6 的性质测定 | 第46-49页 |
| ·实验结果 | 第49-54页 |
| ·嵌合酶AAM6 包涵体的复性实验结果 | 第49页 |
| ·嵌合酶AAM6 在上清中的表达 | 第49-51页 |
| ·嵌合酶 AAM6 的Ni 柱纯化 | 第51页 |
| ·嵌合酶AAM6 的最适温度测定结果 | 第51-52页 |
| ·Na~+ 对嵌合酶AAM6 热稳定性的影响 | 第52-53页 |
| ·嵌合酶AAM6 底物选择性的测定结果 | 第53-54页 |
| ·结果讨论 | 第54-60页 |
| ·嵌合酶AAM6 的可溶性表达 | 第54-57页 |
| ·嵌合酶AAM6 底物选择性变化 | 第57-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 摘要 | 第65-68页 |
| Abstract | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
