| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 第一部分 研究背景 | 第9-44页 |
| 一、人p16~(INK4a)基因及其转录调控机制的研究进展 | 第9-20页 |
| (一) 细胞周期调控的分子机制 | 第9-13页 |
| (二) 人p16~(INK4a)基因的概述 | 第13-17页 |
| (三) 人p16~(INK4a)基因的转录调控 | 第17-20页 |
| 二、组蛋白乙酰化修饰与真核生物基因的转录调控 | 第20-42页 |
| (一) 真核生物的染色质结构与转录调控的关系 | 第21-23页 |
| (二) 组蛋白乙酰化修饰与转录调控 | 第23-25页 |
| (三) 蛋白乙酰化修饰酶 | 第25-32页 |
| (四) p300/CBP复合物的研究进展 | 第32-42页 |
| 三、本论文研究的内容和意义 | 第42-44页 |
| (一) 立题依据 | 第42-43页 |
| (二) 本文的研究内容和意义 | 第43-44页 |
| 第二部分 实验材料与方法 | 第44-63页 |
| 一、实验材料 | 第44-46页 |
| (一) 质粒 | 第44页 |
| (二) 报告基因质粒的构建 | 第44-45页 |
| (三) 蛋白和抗体 | 第45页 |
| (四) 哺乳动物细胞系 | 第45页 |
| (五) 试剂 | 第45-46页 |
| 二、实验方法 | 第46-63页 |
| 1. 分子生物学试验方法 | 第46-56页 |
| (一) 分子克隆 | 第46页 |
| (二) DNA的琼脂糖电泳 | 第46页 |
| (三) 质粒大量制备的方法 | 第46-48页 |
| (四) 哺乳动物细胞总RNA的提取和反转录 | 第48-49页 |
| (五) 逆转录 | 第49-50页 |
| (六) PCR和荧光适时定量realtime PCR | 第50-51页 |
| (七) 染色质免疫沉淀实验 | 第51-53页 |
| (八) 电泳迁移率分析（EMSA） | 第53-55页 |
| (九) RNA 干涉(RNAi) | 第55-56页 |
| 11. 细胞生物学实验方法 | 第56-62页 |
| (一) 哺乳动物细胞系的培养 | 第56页 |
| (二) 真核生物细胞的瞬时转染和荧光素酶报告基因检测 | 第56-57页 |
| (三) 脂质体转染 | 第57-58页 |
| (四) 蛋白质的Western Blotting 分析 | 第58-60页 |
| (五) 免疫共沉淀实验 | 第60-61页 |
| (六) 集落形成实验 | 第61页 |
| (七) 流式细胞术 | 第61-62页 |
| III. 统计分析 | 第62-63页 |
| 第三部分 实验结果与分析 | 第63-83页 |
| 一、p300通过上调p16~(INK4a)的表达诱导细胞周期停滞 | 第63-64页 |
| (一) p16~(INK4a)的过表达抑制HeLa细胞增殖 | 第63页 |
| (二) p300 通过上调p16~(INK4a)的表达诱导细胞周期停滞 | 第63-64页 |
| 二、p300 促进p16~(INK4a)基因的表达 | 第64-65页 |
| 三、p300与Sp1协同促进p16~(INK4a)基因的转录活性 | 第65-67页 |
| (一) Sp1增强p16~(INK4a)启动子报告基因荧光素酶活性并促进其mRNA水平 | 第65-66页 |
| (二) p300与Sp1协同促进p16~(INK4a)的表达 | 第66-67页 |
| 四、p300通过Q区与Sp1相互作用 | 第67-70页 |
| 五、p300被招募到p16~(INK4a)启动子区域，并且其乙酰转移酶活性在调控p16~(INK4a)的表达中起重要作用 | 第70-71页 |
| (一) p300被招募到p16~(INK4a)基因启动子区 | 第70页 |
| (二) p300的乙酰转移酶活性在调控p16~(INK4a)基因转录中起重要作用 | 第70-71页 |
| 六、Sp1招募p300到p16~(INK4a)启动子区域 | 第71-75页 |
| (一) Sp1结合在p16~(INK4a)启动子区域 | 第71-73页 |
| (二) Sp1招募p300到p16~(INK4a)启动子区域 | 第73-74页 |
| (三) Sp1的表达提高p16~(INK4a)启动子组蛋白H4的乙酰化水平 | 第74-75页 |
| 七、p300促进Sp1在p16~(INK4a)启动子上的结合 | 第75-76页 |
| 八、应答p300转录激活的p16~(INK4a)启动子区域Sp1结合位点的鉴定 | 第76-83页 |
| (一) 通过截短突变和点突变来鉴定应答p300转录激活的p16~(INK4a)启动子区域Sp1结合位点 | 第76-77页 |
| (二) p16~(INK4a)基因启动子D位点在p16~(INK4a)表达调控中起重要作用 | 第77-81页 |
| (三) p16~(INK4a)基因启动子D位点参与p300转录激活p16~(INK4a)启动子活性 | 第81-83页 |
| 第四部分 讨论 | 第83-87页 |
| 一、利用小干涉RNA技术诱导基因启动子区域高甲基化 | 第83页 |
| 二、p300通过上调p16~(INK4a)的表达诱导细胞周期的停滞 | 第83-84页 |
| 三、p300通过Sp1招募到p16~(INK4a)启动子区域 | 第84页 |
| 四、p300与Sp1之间作用方式的探讨 | 第84-85页 |
| 五、p300的乙酰转移酶活性在调控p16~(INK4a)表达过程中起重要作用 | 第85-86页 |
| 六、应答p300的p16~(INK4a)启动子区域的Sp1结合位点的探讨 | 第86-87页 |
| 主要结论和创新点 | 第87-88页 |
| 一 主要结论 | 第87页 |
| 二 主要创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-105页 |
| 附录 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第108页 |
