| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 英文缩略表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-33页 |
| ·花色的形成机理 | 第13-20页 |
| ·花瓣的内部结构与色素分布 | 第13页 |
| ·色素的种类 | 第13-16页 |
| ·花色素苷的遗传调控 | 第16-20页 |
| ·花色素苷的化学性质 | 第16-17页 |
| ·花色素苷生化合成途径 | 第17-18页 |
| ·结构基因研究进展 | 第18-19页 |
| ·调节基因研究进展 | 第19-20页 |
| ·F3′5′H基因与蓝色花的形成 | 第20-26页 |
| ·F3′5′H基因的分离 | 第21页 |
| ·F3′5′H同源基因的结构分析 | 第21-23页 |
| ·F3′5′H同源基因的系统进化 | 第23页 |
| ·F3′5′H同源基因的表达特性 | 第23-24页 |
| ·F3′5′H基因在花色素苷合成中的作用机理 | 第24-25页 |
| ·F3′5′H与其它酶的底物竞争关系 | 第25-26页 |
| ·蓝色菊花育种目标的确立 | 第26-27页 |
| ·蓝色菊花育种的理论依据 | 第26-27页 |
| ·菊科蓝色花植物资源简介 | 第27页 |
| ·菊花转基因研究现状 | 第27-29页 |
| ·转基因育种目标及改良株系 | 第27-29页 |
| ·转基因效率与转基因沉默 | 第29页 |
| ·本研究的设计思想 | 第29-32页 |
| ·本研究的目的、意义 | 第29-30页 |
| ·研究设计及研究内容 | 第30-32页 |
| ·主要的技术路线 | 第32-33页 |
| 2 蓝色花形成关键基因的分离 | 第33-56页 |
| ·材料与方法 | 第33-39页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·酶及生化试剂 | 第33页 |
| ·PCR 引物 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-39页 |
| ·花瓣总RNA的提取 | 第33-35页 |
| ·基因组DNA小量提取 | 第35-36页 |
| ·反转录和PCR反应体系 | 第36页 |
| ·RACE | 第36-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·连接 | 第38页 |
| ·转化及阳性克隆筛选 | 第38页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA及酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-53页 |
| ·花瓣总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·瓜叶菊F3′5′H基因cDNA全长的分离 | 第40-43页 |
| ·瓜叶菊F3′5′H同源基因片段的克隆 | 第40-41页 |
| ·瓜叶菊F3′5′H同源基因cDNA末端序列的克隆 | 第41-42页 |
| ·瓜叶菊F3′5′H同源基因cDNA全长的克隆及序列分析 | 第42-43页 |
| ·其它蓝色花植物中F3′5′H同源基因的分离 | 第43-49页 |
| ·飞燕草F3′5′H同源基因片段的克隆 | 第43-44页 |
| ·飞燕草F3′5′H同源基因末端序列的克隆 | 第44-45页 |
| ·飞燕草F3′5′H同源基因cDNA 全长的克隆及序列分析 | 第45-49页 |
| ·矢车菊和马蔺中F3′5′H同源基因的分析 | 第49页 |
| ·DFR和F3H同源基因的分离 | 第49-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·花瓣总RNA的提取方法 | 第53-54页 |
| ·F3′5′H基因的序列分析 | 第54页 |
| ·DFR和F3H的序列分析 | 第54-55页 |
| ·矢车菊与马蔺蓝色花的形成 | 第55页 |
| ·蓝色瓜叶菊中F3′5′H与F3′H基因是否共存 | 第55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 3 瓜叶菊蓝色花形成关键基因的表达分析 | 第56-67页 |
| ·材料与方法 | 第56-60页 |
| ·实验材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第56-57页 |
| ·Northern Blotting方法 | 第57-60页 |
| ·Southern Blotting方法 | 第60页 |
| ·花瓣色素的薄层层析分析 | 第60页 |
| ·结果与分析 | 第60-64页 |
| ·蓝色瓜叶菊色素苷合成关键基因在不同发育期的表达分析 | 第60-62页 |
| ·瓜叶菊F3′5′H基因在不同花色系和器官中的表达分析 | 第62页 |
| ·蓝色瓜叶菊F3′5′H和F3H基因的Southern Blotting分析 | 第62-63页 |
| ·不同花色瓜叶菊色素成份的TLC分析 | 第63-64页 |
| ·结论与讨论 | 第64-67页 |
| ·基因表达特性的分析 | 第64-65页 |
| ·蓝色瓜叶菊花色素合成途径的探讨 | 第65-67页 |
| 4 PCFH和DGFH在大肠杆菌中的表达 | 第67-73页 |
| ·材料与方法 | 第67-70页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·植物材料、菌株及质粒 | 第67页 |
| ·PCR引物 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-70页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第67-68页 |
| ·目的蛋白的诱导 | 第68页 |
| ·总蛋白提取 | 第68-69页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第69页 |
| ·可溶性蛋白与包涵体分析 | 第69-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-72页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·PCFH和DGFH基因在大肠杆菌中的表达 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72-73页 |
| 5 PCFH和DGFH对转基因烟草花色的影响 | 第73-86页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·PCR引物 | 第73页 |
| ·方法 | 第73-75页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第73页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第73页 |
| ·农杆菌介导的叶盘法转化烟草程序 | 第73-74页 |
| ·阳性苗的PCR和PCR-Southern Blotting筛选 | 第74-75页 |
| ·色素的HPLC分析 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-83页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第75-77页 |
| ·转基因烟草的培养与阳性苗筛选 | 第77-79页 |
| ·PCFH对转基因烟草花色素合成的影响 | 第79-80页 |
| ·DGFH对转基因烟草花色素合成的影响 | 第80页 |
| ·转基因烟草花色变化的CIE分析 | 第80-83页 |
| ·讨论 | 第83-86页 |
| ·关于色素化学分析方法 | 第83页 |
| ·关于转基因烟草花色变化的分析 | 第83页 |
| ·关于叶盘法转化烟草和菊花 | 第83-84页 |
| ·关于蓝色菊花转基因育种研究 | 第84-86页 |
| 6 结论 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 附录一：攻读学位期间发表论文简介 | 第96-97页 |
| 附录二：载体和Marker | 第97-100页 |
| 附录三：实验图表 | 第100-102页 |
| 博硕士论文同意发表的声明 | 第102页 |
