| 摘要 | 第1-6页 |
| Summary | 第6-16页 |
| 英文缩略表 | 第16-18页 |
| 第一章 绪言 | 第18-26页 |
| ·研究背景及目的、意义 | 第18-20页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪繁殖与呼吸综合征疫苗 | 第18-19页 |
| ·猪圆环病毒和猪圆环病毒疫苗 | 第19-20页 |
| ·国内外研究进展 | 第20-24页 |
| ·核酸疫苗 | 第20-21页 |
| ·活载体疫苗 | 第21-22页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征的疫苗研究进展 | 第22-24页 |
| ·猪2 型圆环病毒的疫苗研究进展 | 第24页 |
| ·研究内容与方法 | 第24-26页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒基因克隆、结构特征分析及基因图谱绘制 | 第26-65页 |
| 一、猪繁殖与呼吸综合征病毒5’端非编码区的分子克隆及序列分析 | 第27-35页 |
| 1 材料与方法 | 第27-32页 |
| ·病毒 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·菌种与载体 | 第27-28页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·RT-PCR | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的纯化、回收 | 第29-30页 |
| ·PCR 纯化产物与pMD18-T 载体连接 | 第30页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第30页 |
| ·转化感受态细胞 | 第30-31页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31页 |
| ·5’NCR 的序列分析 | 第31-32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-34页 |
| ·PCR 扩增反应 | 第32页 |
| ·核苷酸同源性分析 | 第32-33页 |
| ·5’NCR 二级结构分析 | 第33-34页 |
| 3 讨论 | 第34-35页 |
| 二、猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白基因的克隆及其基因特征的分析 | 第35-50页 |
| 1 材料和方法 | 第35-37页 |
| ·病毒 | 第35页 |
| ·质粒和菌种 | 第35-36页 |
| ·试剂和工具酶 | 第36页 |
| ·引物 | 第36-37页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第37页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第37页 |
| ·目的基因的克隆和鉴定 | 第37页 |
| ·序列分析 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-49页 |
| ·目的基因的克隆 | 第37-39页 |
| ·非结构蛋白基因的序列测定结果 | 第39-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 三、猪繁殖与呼吸综合征病毒结构蛋白基因的克隆及其基因特征的分析 | 第50-59页 |
| 1 材料和方法 | 第51-52页 |
| ·病毒 | 第51页 |
| ·质粒和菌种 | 第51页 |
| ·试剂和工具酶 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·病毒RNA的提取 | 第51-52页 |
| ·RT-PCR 反应 | 第52页 |
| ·目的基因的克隆和鉴定 | 第52页 |
| ·序列分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-58页 |
| ·目的基因的克隆 | 第52-54页 |
| ·结构蛋白基因的序列测定结果 | 第54-55页 |
| ·结构蛋白基因的同源性分析 | 第55-57页 |
| ·遗传进化树 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 四、猪繁殖与呼吸综合征病毒3’端非编码区的分子克隆及序列分析 | 第59-64页 |
| 1 材料与方法 | 第59-61页 |
| ·病毒 | 第59页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·菌种与载体 | 第59页 |
| ·引物 | 第59-60页 |
| ·3’NCR 的分子克隆 | 第60-61页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第61页 |
| ·3’NCR 的序列分析 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-63页 |
| ·PCR 扩增结果及阳性重组质粒酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·核苷酸同源性分析 | 第62页 |
| ·3’NCR 二级结构分析 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 小结 | 第64-65页 |
| 第三章 猪繁殖与呼吸综合征病毒 E 基因腺病毒载体的构建及分子免疫研究 | 第65-74页 |
| 1 材料和方法 | 第67-70页 |
| ·毒株与细胞 | 第67页 |
| ·载体及菌株 | 第67页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第67页 |
| ·细胞培养 | 第67页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第67页 |
| ·E 基因的制备 | 第67-68页 |
| ·含感受态细胞的准备 | 第68页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第68页 |
| ·重组腺病毒质粒的构建 | 第68页 |
| ·转染AD-293细胞获得重组腺病毒 | 第68-69页 |
| ·RT-PCR 检测重组病毒的产生 | 第69页 |
| ·动物 | 第69页 |
| ·小鼠脾脏 T 淋巴细胞制备及T 细胞增殖实验 | 第69页 |
| ·免疫小鼠血清抗体检测 | 第69-70页 |
| 2 结果与分析 | 第70-72页 |
| ·E 基因的扩增和重组质粒的酶切鉴定 | 第70页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第70-71页 |
| ·获得复制缺陷型腺病毒质粒 | 第71页 |
| ·重组腺病毒的收获及鉴定 | 第71-72页 |
| ·T 淋巴细胞增殖反应的测定结果 | 第72页 |
| ·实验小鼠血清中 PCV2 特异性抗体测定 | 第72页 |
| 3 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 三株猪2 型圆环病毒流行毒株基因克隆、结构特征分析及基因图谱绘制 | 第74-99页 |
| 1 材料与方法 | 第77-80页 |
| ·病毒样品 | 第77页 |
| ·载体与菌株 | 第77页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第77页 |
| ·引物设计与合成 | 第77-78页 |
| ·仪器与设备 | 第78页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第78-79页 |
| ·病毒DNA 的PCR 扩增 | 第79页 |
| ·PCR 产物的纯化、回收 | 第79-80页 |
| ·PCR 纯化产物与pMD18-T 载体连接 | 第80页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第80页 |
| ·转化感受态细胞 | 第80页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第80页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第80页 |
| ·序列分析 | 第80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-96页 |
| ·各猪场组织病料中 PCV2 的 PCR 检测结果 | 第80-82页 |
| ·PCV2 分离株的全基因序列测定与分析 | 第82-87页 |
| ·3 株猪圆环病毒2 型核苷酸序列与已发表序列核苷酸同源性比较 | 第87-89页 |
| ·三株猪圆环病毒2 型ORF1 核苷酸及推导氨基酸序列同源性比较 | 第89-91页 |
| ·三株猪圆环病毒2 型ORF2 核苷酸及推导氨基酸序列同源性比较 | 第91-93页 |
| ·三株ORF2 基因编码的氨基酸抗原性和亲水性分析 | 第93-96页 |
| 3 讨论 | 第96-99页 |
| 第五章 猪2 型圆环病毒核酸载体构建及分子免疫研究 | 第99-108页 |
| 1 材料和方法 | 第100-103页 |
| ·质粒及菌株 | 第100页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第100页 |
| ·引物 | 第100-101页 |
| ·目的基因的获得 | 第101页 |
| ·真核表达质粒获得 | 第101-102页 |
| ·免疫用质粒的制备 | 第102页 |
| ·实验动物 | 第102页 |
| ·实验分组 | 第102页 |
| ·实验小鼠T 淋巴细胞增殖反应的测定 | 第102-103页 |
| ·免疫小鼠血清抗体水平检测 | 第103页 |
| 2 结果与分析 | 第103-106页 |
| ·PCR 扩增结果及阳性重组质粒酶切鉴定 | 第103-105页 |
| ·T 淋巴细胞增殖反应的测定结果 | 第105页 |
| ·实验小鼠血清中 PCV2 特异性抗体测定 | 第105-106页 |
| 3 讨论 | 第106-108页 |
| 第六章 猪2 型圆环病毒Cap 基因的腺病毒载体构建及分子免疫研究 | 第108-119页 |
| 1 材料和方法 | 第110-114页 |
| ·质粒及菌株 | 第110页 |
| ·工具酶及其它试剂盒 | 第110页 |
| ·引物 | 第110页 |
| ·目的基因的获得 | 第110页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的获得 | 第110-111页 |
| ·大肠杆菌 JM109 感受态细菌的制备 | 第111页 |
| ·转化感受态细胞 | 第111页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第111页 |
| ·重组腺病毒载体的鉴定 | 第111-112页 |
| ·同源重组获得腺病毒载体 | 第112-113页 |
| ·转染 AD-293 细胞获得重组腺病毒 | 第113页 |
| ·PCR 检测重组病毒的产生 | 第113页 |
| ·动物 | 第113-114页 |
| ·实验分组 | 第114页 |
| ·T 淋巴细胞悬液的制备及 T 淋巴细胞增殖反应的测定 | 第114页 |
| ·免疫小鼠血清抗体水平检测 | 第114页 |
| 2 结果与分析 | 第114-117页 |
| ·衣壳蛋白 Cap 基因的扩增 | 第114页 |
| ·重组腺病毒穿梭载体的构建 | 第114-115页 |
| ·获得复制缺陷型腺病毒质粒 | 第115页 |
| ·荧光显微镜检测报告基因 EGFP 的表达 | 第115-116页 |
| ·重组腺病毒质粒转染293 细胞 | 第116页 |
| ·T 淋巴细胞增殖反应的测定结果 | 第116-117页 |
| ·实验小鼠血清中 PCV2 特异性抗体测定 | 第117页 |
| 3 讨论 | 第117-119页 |
| 第七章 结论 | 第119-120页 |
| 第八章 文献综述 | 第120-151页 |
| 文献综述一：猪圆环病毒研究进展 | 第120-133页 |
| 1 病原学 | 第120-124页 |
| 2 PCV2 流行病学 | 第124-126页 |
| 3 PCV2 感染的病理变化 | 第126-128页 |
| 4 PCV2 的致病机理 | 第128-129页 |
| 5 PCV2 的诊断技术 | 第129-131页 |
| 6 PCV2 的防治 | 第131-132页 |
| 7 展望 | 第132-133页 |
| 文献综述二：猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第133-151页 |
| 1 病原学 | 第133-134页 |
| 2 PRRSV 分子生物学研究 | 第134-139页 |
| 3 PRRS 病毒的遗传变异 | 第139-142页 |
| 4 流行病学 | 第142-143页 |
| 5 临床症状 | 第143-145页 |
| 6 病理变化和发病机制 | 第145-149页 |
| 7 疫苗免疫及防制策略 | 第149-150页 |
| 8 结语 | 第150-151页 |
| 参考文献 | 第151-162页 |
| 致谢 | 第162-163页 |
| 作者简介 | 第163-164页 |
| 导师简历 | 第164-165页 |
