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两种天然倍半萜的抗肿瘤活性及其生合成中酶的基因克隆

摘要第1-12页
ABSTRACT第12-14页
缩略语说明第14-16页
第一章 绪论第16-33页
   ·细胞凋亡与肿瘤第16-18页
     ·细胞凋亡的特征第16-17页
     ·细胞凋亡异常与肿瘤发生第17-18页
   ·DNA复制过程和一些复制蛋白的抑制作用第18-21页
   ·细胞周期调控因子与癌变机制第21-23页
   ·倍半萜内酯类化合物的研究进展第23-24页
     ·倍半萜内酯类化合物的结构类型第23页
     ·倍半萜内酯类化合物的药理活性第23-24页
   ·倍半萜类化合物生物合成途径与相关的酶第24-33页
     ·植物中倍半萜类化合物的生源途径第25-27页
     ·萜类环化酶基因克隆的进展第27-29页
     ·生物信息学应用:DNA序列分析简介第29-33页
第二章 抱茎苦荬菜中倍半萜内酯苷及其苷元的抗癌活性研究第33-52页
   ·实验材料第33-35页
     ·药材第33页
     ·细胞第33-34页
     ·药品第34页
     ·实验试剂第34页
     ·实验仪器第34-35页
   ·实验方法第35-38页
     ·倍半萜内酯苷及其苷元的制备第35-36页
     ·倍半萜内酯苷及其苷元的细胞毒作用第36-37页
     ·苷元的细胞毒机制第37-38页
   ·实验结果第38-48页
     ·倍半萜内酯及其苷元的制备第38-41页
     ·内酯苷和苷元对三种肿瘤细胞的细胞毒作用即IC_(50)值第41-42页
     ·内酯苷元诱导多种细胞死亡呈明显剂量依赖关系第42-43页
     ·倒置显微镜观察苷元对细胞的作用第43-44页
     ·SV40 DNA体外复制反应第44-45页
     ·RPA的单链DNA结合活性第45-46页
     ·细胞周期阻滞作用第46-48页
   ·讨论第48-50页
   ·小结第50-52页
第三章 抱茎苦荬菜中吉玛烷A合成酶的基因克隆与体外表达第52-86页
   ·实验材料第52-54页
     ·植物材料第52页
     ·菌株和质粒第52页
     ·酶与试剂第52-53页
     ·培养基第53页
     ·引物第53-54页
     ·实验仪器第54页
   ·实验方法第54-68页
     ·异硫氰酸胍法提取植物总RNA第54-55页
     ·抱茎苦荬菜中吉玛烷A合成酶的基因克隆第55-64页
     ·抱茎苦荬菜中吉玛烷A合成酶在大肠杆菌中的表达第64-68页
   ·实验结果第68-82页
     ·兼并引物的设计第68-70页
     ·从抱茎苦卖菜中提取了总RNA第70页
     ·紫外检测RNA的纯度和浓度第70页
     ·RT-PCR扩增Cs-GAS-1第70-71页
     ·酶切鉴定重组质粒CsGAS-P-1第71页
     ·PCR鉴定重组质粒CsGAS-P-1第71-72页
     ·RT-PCR扩增Cs-GAS-2第72页
     ·酶切鉴定重组质粒CsGAS-P-2第72-73页
     ·PCR鉴定重组质粒CsGAS-P-2第73页
     ·3’RACE扩增Cs-GAS-3第73-74页
     ·酶切鉴定重组质粒CsGAS-P-3第74页
     ·PCR鉴定重组质粒CsGAS-P-3第74页
     ·5’RACE扩增Cs-GAS-5第74-75页
     ·酶切鉴定重组质粒CsGAS-P-5第75页
     ·PCR鉴定重组质粒CsGAS-P-5第75页
     ·吉玛烷A合成酶基因cDNA序列及其开放阅读框架第75-77页
     ·RT-PCR扩增Cs-GAS第77页
     ·酶切鉴定重组质粒CsGAS-P第77页
     ·PCR鉴定重组质粒CsGAS-P第77-78页
     ·序列分析第78-81页
     ·抱茎苦荬菜中吉玛烷A合成酶基因的提交第81页
     ·抱茎苦荬菜中吉玛烷A合成酶在大肠杆菌中的表达第81-82页
   ·讨论第82-84页
   ·小结第84-86页
结论第86-87页
参考文献第87-93页
附图第93-107页
致谢第107-108页
附录第108页

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