| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-45页 |
| ·无细胞蛋白质合成系统的研究进展 | 第15-24页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·无细胞蛋白质合成系统的简介 | 第15-16页 |
| ·无细胞系统中蛋白质合成的机理和优越性 | 第16-17页 |
| ·常用无细胞抽提物的制备过程 | 第17-18页 |
| ·无细胞系统中影响蛋白质合成的两个关健问题 | 第18-22页 |
| ·无细胞蛋白质合成系统反应器的设计和操作方式 | 第22-23页 |
| ·无细胞系统蛋白质合成技术的应用和前景 | 第23-24页 |
| ·防御素 | 第24-36页 |
| ·引言 | 第24-25页 |
| ·人防御素的组织分布 | 第25-26页 |
| ·人防御素的分子生物学特征 | 第26-30页 |
| ·人防御素的抗菌活性及作用机理 | 第30-33页 |
| ·人防御素的医学和药用价值及前景展望 | 第33-34页 |
| ·基因工程生产人防御素 | 第34-36页 |
| ·艾滋病治疗药及其研究进展 | 第36-42页 |
| ·艾滋病 | 第36-37页 |
| ·HIV的复制及整合机制 | 第37-38页 |
| ·目前艾滋病治疗药及治疗机理 | 第38-42页 |
| ·小结 | 第42页 |
| ·本课题拟研究的内容 | 第42-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·质粒 | 第45页 |
| ·大肠杆菌菌种 | 第45页 |
| ·抗体 | 第45页 |
| ·工具酶及试剂盒 | 第45页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·实验及分析方法 | 第46-49页 |
| ·分子克隆相关实验 | 第46-47页 |
| ·菌体浓度测定 | 第47页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第47页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第47页 |
| ·Western blotting 分析 | 第47页 |
| ·GFP荧光强度测定 | 第47-49页 |
| 第三章 HBD-2表达载体的构建 | 第49-61页 |
| ·引言 | 第49-50页 |
| ·材料与方法 | 第50-51页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·实验方法 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-59页 |
| ·hBD2，shBD2，trxA和 GFP基因的获得 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的构建 | 第52-56页 |
| ·对构建好的载体进行鉴定 | 第56页 |
| ·构建好的表达载体的图谱 | 第56-57页 |
| ·人β-防御素-2在大肠杆菌中的表达 | 第57-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第四章 大肠杆菌无细胞系统间歇反应合成 HBD-2 | 第61-73页 |
| ·引言 | 第61页 |
| ·材料与方法 | 第61-63页 |
| ·实验材料 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-63页 |
| ·结果与讨论 | 第63-71页 |
| ·在无细胞间歇模式反应体系中表达防御素蛋白 | 第63-69页 |
| ·大肠杆菌无细胞系统合成可溶性目标蛋白的研究 | 第69-70页 |
| ·无细胞系统中两种不同基因表达水平的比较 | 第70页 |
| ·不同系列表达载体的目标蛋白表达水平的对比 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 第五章 大肠杆菌无细胞系统连续交换式反应合成 HBD-2及产物的分离纯化 | 第73-85页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·材料与方法 | 第74-76页 |
| ·仪器与试剂 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·结果与讨论 | 第76-83页 |
| ·CECF模式下的无细胞反应 | 第76-79页 |
| ·不同无细胞操作方式下蛋白质表达水平的比较 | 第79-80页 |
| ·亲和层析分离融合蛋白 | 第80-82页 |
| ·融合蛋白的脱盐 | 第82页 |
| ·CNBr消化融合蛋白及 HBD-2的活性测定 | 第82-83页 |
| ·小结 | 第83-85页 |
| 第六章 大肠杆菌无细胞系统表达 HBD-3,4 | 第85-95页 |
| ·引言 | 第85-86页 |
| ·材料与方法 | 第86-87页 |
| ·实验材料 | 第86页 |
| ·实验方法 | 第86-87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-94页 |
| ·采用PCR方法克隆trxA和 GFP基因 | 第87-88页 |
| ·表达载体的构建 | 第88-91页 |
| ·HBD-3，4目标蛋白的理论分子量 | 第91页 |
| ·人β-防御素-3,4在无细胞系统间歇式反应模式下的表达 | 第91-94页 |
| ·小结 | 第94-95页 |
| 第七章 大肠杆菌无细胞系统表达 HIV病毒蛋白的初探 | 第95-113页 |
| ·引言 | 第95-96页 |
| ·材料与方法 | 第96-103页 |
| ·实验材料 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-103页 |
| ·结果与讨论 | 第103-111页 |
| ·HIV基因质粒表达模板的构建 | 第103-105页 |
| ·HIV基因PCR模板的构建 | 第105-106页 |
| ·HIV基因在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统中的表达 | 第106-108页 |
| ·HIV两种基因(人源、合成)在无细胞系统中表达的比较 | 第108-111页 |
| ·小结 | 第111-113页 |
| 第八章 大肠杆菌无细胞系统的构建 | 第113-137页 |
| ·引言 | 第113页 |
| ·材料与方法 | 第113-118页 |
| ·实验材料 | 第113-114页 |
| ·实验方法 | 第114-118页 |
| ·结果与讨论 | 第118-136页 |
| ·报导基因表达质粒的构建 | 第118页 |
| ·A19生长曲线的测定 | 第118-119页 |
| ·破碎压力对抽提物中蛋白质含量的影响 | 第119-120页 |
| ·制备抽提物时离心力大小的摸索 | 第120页 |
| ·对抑制表达的原因进行查找和确定 | 第120-123页 |
| ·制备大肠杆菌抽提物过程中的透析步骤和保存方法的优化 | 第123-124页 |
| ·底物和能量再生体系的优化 | 第124-136页 |
| ·小结 | 第136-137页 |
| 第九章 结论和建议 | 第137-141页 |
| ·结论 | 第137-139页 |
| ·建议 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 发表论文及参加会议 | 第143-145页 |
| 参考文献 | 第145-152页 |
