| 文献综述 | 第1-37页 |
| 综述一 免疫球蛋白的生物学特性 | 第9-24页 |
| 1 免疫球蛋白 | 第9-17页 |
| 2 牛抗体基因的研究进展 | 第17-24页 |
| 综述二 基因打靶方法制备生物反应器 | 第24-37页 |
| 1 基因打靶的理论基础-同源重组 | 第24-25页 |
| 2 基因打靶载体 | 第25-27页 |
| 3 基因打靶策略 | 第27-28页 |
| 4 影响基因打靶的一些因素 | 第28-30页 |
| 5 体细胞基因打靶技术的研究 | 第30-31页 |
| 6 利用基因工程技术生产人类抗体的研究进展 | 第31-35页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 实验一 牛抗体重链基因中JH及Eμ片段的敲除 | 第37-63页 |
| 1 材料 | 第37-39页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第37-38页 |
| ·各种酶及试剂 | 第38页 |
| ·PCR扩增及测序引物 | 第38-39页 |
| ·序列分析软件 | 第39页 |
| 2 液和试剂的配制 | 第39-41页 |
| 3 主要仪器 | 第41-42页 |
| 4 基本实验方法 | 第42-50页 |
| 5 实验结果 | 第50-58页 |
| ·打靶载体左同源臂J的克隆与分析 | 第50页 |
| ·打靶载体右同源臂M1和M2的克隆与分析 | 第50-51页 |
| ·打靶载体的构建与分析 | 第51-56页 |
| ·牛胎儿成纤维细胞对G418毒性敏感性检测 | 第56页 |
| ·脂质体和磷酸钙法转染牛胎儿成纤维细胞的条件优化及比较 | 第56-57页 |
| ·少量细胞的PCR反应 | 第57-58页 |
| ·阳性细胞克隆的PCR鉴定 | 第58页 |
| 6 分析与讨论 | 第58-63页 |
| ·打靶载体的设计和构建 | 第58-60页 |
| ·PCR实验中的注意问题 | 第60-61页 |
| ·细胞转染方法的选择和优化 | 第61-62页 |
| ·基因打靶阳性细胞克隆的筛选 | 第62-63页 |
| 实验二 牛胚系基因中JH和Cμ抗体基因的扩增与分析 | 第63-77页 |
| 1 材料 | 第63-64页 |
| ·动物材料 | 第63页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63-64页 |
| ·PCR扩增所使用引物 | 第64页 |
| 2 溶液的配制 | 第64-65页 |
| 3 主要仪器 | 第65页 |
| 4 实验方法 | 第65-68页 |
| 5 实验结果 | 第68-74页 |
| ·两个不同JH片段的扩增与分析 | 第68-70页 |
| ·两个不同Cμ片段的扩增及分析 | 第70-71页 |
| ·重组VDJH基因及IgM cDNA基因片段的扩增及分析 | 第71-72页 |
| ·JH-Cμ序列的克隆与分析 | 第72-73页 |
| ·牛基因组中JH及Cμ的拷贝数的Southern blot分析 | 第73-74页 |
| 6 讨论 | 第74-77页 |
| ·PCR反应的特异性 | 第74页 |
| ·牛基因组中的两个JH基因 | 第74-75页 |
| ·牛基因组中的两个Cμ基因 | 第75页 |
| ·牛基因组中的JH-Cμ基因组合 | 第75-76页 |
| ·抗体基因的多样性及进化 | 第76-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
