水稻蛋白激酶的克隆及体外表达
| 1 引言 | 第1-15页 |
| ·研究意义 | 第10页 |
| ·蛋白激酶概述 | 第10-11页 |
| ·植物蛋白激酶的研究概述 | 第11-13页 |
| ·水稻基因组的研究进展 | 第13页 |
| ·水稻基因组测序的研究进展 | 第13页 |
| ·水稻蛋白激酶的研究现状 | 第13页 |
| ·研究展望 | 第13-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-25页 |
| ·试验材料 | 第15-16页 |
| ·生物材料 | 第15页 |
| ·药品 | 第15页 |
| ·仪器 | 第15-16页 |
| ·水稻种子噬菌体CDNA文库的滴度测定 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·操作步骤 | 第16页 |
| ·噬菌体库转变成细菌库 | 第16-17页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·操作步骤 | 第17页 |
| ·提取质粒DNA | 第17-18页 |
| ·试剂 | 第17页 |
| ·操作步骤 | 第17-18页 |
| ·PCR扩增水稻蛋白激酶 | 第18-20页 |
| ·第一次PCR | 第18-19页 |
| ·第一次PCR产物纯化 | 第19页 |
| ·第二次PCR | 第19-20页 |
| ·第二次PCR产物纯化 | 第20页 |
| ·酵母菌转化培养 | 第20-21页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·操作步骤 | 第20-21页 |
| ·从酵母中提取质粒DNA | 第21-22页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·操作步骤 | 第21-22页 |
| ·细菌转化筛选阳性克隆 | 第22-23页 |
| ·细菌感受态制备 | 第22页 |
| ·电击法将重组载体转入宿主细胞 | 第22页 |
| ·提取质粒DNA并酶切鉴定 | 第22-23页 |
| ·测序验证目的片段 | 第23页 |
| ·诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第23-24页 |
| ·试剂 | 第23页 |
| ·操作步骤 | 第23-24页 |
| ·激酶蛋白特征及序列相似性分析 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-39页 |
| ·水稻种子cDNA文库滴度 | 第25页 |
| ·细菌库的滴度 | 第25页 |
| ·提取质粒DNA得到PCR模板 | 第25-26页 |
| ·第一次PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·第二次PCR扩增 | 第27页 |
| ·酵母转化、细菌转化及酶切鉴定 | 第27-30页 |
| ·克隆PK1的酶切鉴定与分析 | 第28页 |
| ·克隆PK2的酶切鉴定与分析 | 第28-29页 |
| ·克隆PK3的酶切鉴定与分析 | 第29页 |
| ·克隆PK4的酶切鉴定与分析 | 第29-30页 |
| ·克隆PK5的酶切鉴定与分析 | 第30页 |
| ·测序结果及分析 | 第30-35页 |
| ·克隆PK1的测序结果及分析 | 第30-31页 |
| ·克隆PK2的测序结果及分析 | 第31-32页 |
| ·克隆PK3的测序结果及分析 | 第32-33页 |
| ·克隆PK4的测序结果及分析 | 第33-34页 |
| ·克隆PK5的测序结果及分析 | 第34-35页 |
| ·激酶蛋白质表达及SDS-PAGE检测 | 第35页 |
| ·激酶蛋白特征及序列相似性分析 | 第35-39页 |
| ·PK1的蛋白结构及序列相似性分析 | 第36页 |
| ·PK2的蛋白特征及序列相似性分析 | 第36-37页 |
| ·PK3的蛋白特征及序列相似性分析 | 第37页 |
| ·PK4的蛋白特征及序列相似性分析 | 第37-38页 |
| ·PK5的蛋白特征及序列相似性分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-44页 |
| ·蛋白激酶PCR扩增 | 第39页 |
| ·本研究获得的蛋白激酶的功能分析 | 第39-43页 |
| ·PK1可能的功能 | 第39-40页 |
| ·PK2可能的功能 | 第40页 |
| ·PK3可能的功能 | 第40-41页 |
| ·PK4可能的功能 | 第41-42页 |
| ·PK5可能的功能 | 第42-43页 |
| ·规模化克隆水稻蛋白激酶的探讨 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-55页 |
| 附录 | 第55-74页 |
| 在读期间发表论文 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
