| 摘要 | 第1-10页 |
| Absract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 第一部分 O型口蹄疫病毒VP1 T细胞与B细胞表位基因双拷贝串联表达产物的免疫应答 | 第16-49页 |
| 第一章 口蹄疫病毒研究进展 | 第16-23页 |
| 1．1 口蹄疫病毒分子生物学特征 | 第16-20页 |
| 1．1．1 口蹄疫病毒基因组结构 | 第17页 |
| 1．1．2 口蹄疫病毒基因表达 | 第17页 |
| 1．1．3 口蹄疫病毒结构蛋白及其功能 | 第17-18页 |
| 1．1．4 FMDV非结构蛋白及功能 | 第18-20页 |
| 1．1．5 FMDV的变异性 | 第20页 |
| 1．2 口蹄疫病毒的复制与感染 | 第20-23页 |
| 1．2．1 FMDV感染细胞的机制 | 第20页 |
| 1．2．2 FMDVRNA的合成 | 第20-21页 |
| 1．2．3 FMDV的翻译 | 第21页 |
| 1．2．4 病毒颗粒的包装 | 第21页 |
| 1．2．5 病毒的病原性 | 第21-23页 |
| 第二章 实验部分 | 第23-47页 |
| 2．1 表达载体构建 | 第23-29页 |
| 2．1．1 试验材料与溶液配制 | 第23-24页 |
| 2．1．2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2．1．2．1 表达载体构建的策略 | 第24页 |
| 2．1．2．2 表达载体pET30a | 第24-25页 |
| 2．1．2．3 质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2．1．2．4 感受态细胞的制备(CaCl_2方法) | 第26页 |
| 3．1．2．5 质粒的转化 | 第26页 |
| 2．1．2．6 目的基因片段的获得 | 第26-27页 |
| 2．1．2．7 2020VP1基因的PCR扩增与克隆 | 第27-28页 |
| 2．1．2．8 载体和目的片段的回收、双酶切与连接 | 第28页 |
| 2．1．2．9 重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| 2．1．3 实验结果 | 第28-29页 |
| 2．2 pET30a-2020-2020的表达及蛋白鉴定 | 第29-33页 |
| 2．2．1 实验材料及溶液配制 | 第29-30页 |
| 2．2．2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2．2．2．1 重组表达载体pET30a-2020-2020的表达 | 第30-31页 |
| 2．2．2．2 表达蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| 2．2．2．3 凝胶的考马斯亮蓝染色及脱色 | 第31页 |
| 2．2．2．4 免疫印迹 | 第31-32页 |
| 2．2．3 实验结果 | 第32-33页 |
| 2．2．3．1 pET30a-2020-2020/BL_(21)(DE_3)RIL表达 | 第32页 |
| 2．2．3．2 免疫印迹 | 第32-33页 |
| 2．3 重组蛋白r2020-2020的纯化 | 第33-35页 |
| 2．3．1 实验材料及溶液配制 | 第33页 |
| 2．3．2 实验方法 | 第33-34页 |
| 2．3．2．1 发酵 | 第33-34页 |
| 2．3．2．2 重组蛋白r2020-2020变性 | 第34页 |
| 2．3．2．3 重组蛋白的纯化 | 第34页 |
| 2．3．2．4 纯化蛋白的复性 | 第34页 |
| 2．3．3 实验结果 | 第34-35页 |
| 2．4 重组蛋白r2020-2020的定量及ELISA | 第35-38页 |
| 2．4．1 实验材料及溶液配制 | 第35-36页 |
| 2．4．2 实验方法 | 第36-37页 |
| 2．4．2．1 纯化蛋白质的定量 | 第36页 |
| 2．4．2．2 ELISA检测r2020-2020蛋白与FMDV疫苗免疫动物血清的结合活性 | 第36-37页 |
| 2．4．3 实验结果 | 第37-38页 |
| 2．4．3．1 蛋白质浓度 | 第37页 |
| 2．4．3．2 ELISA反应结果 | 第37-38页 |
| 2．5 动物免疫及免疫动物血清抗体监测 | 第38-40页 |
| 2．5．1 实验材料及试剂 | 第38页 |
| 2．5．2 实验方法 | 第38-39页 |
| 2．5．2．1 r2020-2020免疫物的制备 | 第38页 |
| 2．5．2．2 动物免疫 | 第38-39页 |
| 2．5．2．3 免疫后兔血清抗体增长情况 | 第39页 |
| 2．5．3 实验结果 | 第39-40页 |
| 2．6 免疫豚鼠T细胞增殖实验 | 第40-42页 |
| 2．6．1 实验材料及溶液配制 | 第40页 |
| 2．6．2 实验方法 | 第40-41页 |
| 2．6．2．1 FMDV抗原制备 | 第40页 |
| 2．6．2．2 MTT法检测T细胞增殖 | 第40-41页 |
| 2．6．3 实验结果 | 第41-42页 |
| 2．7 豚鼠血清的细胞中和实验 | 第42-43页 |
| 2．7．1 实验材料 | 第42页 |
| 2．7．2 细胞中和实验 | 第42-43页 |
| 2．7．3 实验结果 | 第43页 |
| 2．8 豚鼠血清乳鼠保护实验 | 第43-44页 |
| 2．8．1 实验材料 | 第43页 |
| 2．8．2 实验方法 | 第43-44页 |
| 2．8．2．1 FMDV对乳鼠的LD_(50) | 第43页 |
| 2．8．2．2 豚鼠血清对乳鼠的保护 | 第43-44页 |
| 2．8．3 实验结果 | 第44页 |
| 2．9 讨论 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-49页 |
| 第二部分：O型FMDV VP1T细胞与B细胞表位双拷贝基因与肠毒素大肠杆菌LTB、STI肠毒素基因融合表达产物的免疫应答 | 第49-78页 |
| 第一章 肠毒素大肠杆菌热敏性肠毒素研究进展 | 第49-54页 |
| 1．1 LT的理化性质和生物学功能 | 第49-50页 |
| 1．1．1 LI理化性质 | 第49页 |
| 1．1．2 LT生物学功能 | 第49-50页 |
| 1．2 LT免疫原性研究 | 第50-51页 |
| 1．2．1 LT免疫原性表位 | 第50页 |
| 1．2．2 LT的免疫应答机理 | 第50-51页 |
| 1．2．3 LT免疫原性应用 | 第51页 |
| 1．3 LT免疫佐剂作用 | 第51-54页 |
| 1．3．1 LT佐剂类型 | 第51-52页 |
| 1．3．2 LT的佐剂作用 | 第52页 |
| 1．3．3 LT佐剂作用的应用 | 第52-54页 |
| 第二章 肠毒素大肠杆菌热稳定性肠毒素研究进展 | 第54-56页 |
| 2．1 ST理化性质 | 第54页 |
| 2．2 ST的生物学功能 | 第54-55页 |
| 2．3 ST的免疫原性研究 | 第55-56页 |
| 第三章 实验部分 | 第56-73页 |
| 3．1 表达载体构建 | 第56-61页 |
| 3．1．1 试验材料与溶液配制 | 第56页 |
| 3．1．2 实验方法 | 第56-59页 |
| 3．1．2．1 表达载体构建的策略 | 第56-57页 |
| 3．1．2．2 pET32a表达载体 | 第57-58页 |
| 3．1．2．3 质粒提取，感受态细胞制备，转化 | 第58页 |
| 3．1．2．4 目的基因片断的获得 | 第58-59页 |
| 3．1．2．5 目的片断的回收、酶切、连接 | 第59页 |
| 3．1．2．6 重组表达载体的鉴定 | 第59页 |
| 3．1．3 实验结果 | 第59-61页 |
| 3．1．3．1 pET32a—2020a鉴定 | 第59页 |
| 3．1．3．2 pET32a—2020a—LTB-STI鉴定 | 第59-60页 |
| 3．1．3．3 pET32a—2020—LTB-2020-STI鉴定 | 第60-61页 |
| 3．2 重组蛋白表达 | 第61-63页 |
| 3．2．1 实验材料及溶液配制 | 第61页 |
| 3．2．3 实验方法 | 第61页 |
| 3．2．3 实验结果 | 第61-63页 |
| 3．2．3．1 pET32a—2020a重组蛋白的表达 | 第61-62页 |
| 3．2．3．2 pET32a-2020a-LTB-STI重组蛋白的表达 | 第62-63页 |
| 3．2．3．3 pET32a-2020-LTB-2020-STI重组蛋白的表达 | 第63页 |
| 3．3 pET32a-2020-LTB-2020-STI重组蛋白的纯化及动物免疫 | 第63-64页 |
| 3．3．1 实验材料及溶液配置 | 第63页 |
| 3．3．2 实验方法 | 第63页 |
| 3．3．2．1 蛋白纯化、复性及抗原制备 | 第63页 |
| 3．3．2．2 动物免疫 | 第63页 |
| 3．3．3 实验结果 | 第63-64页 |
| 3．4 融合蛋白pET32a-2020-LTB-2020-STI的LTB免疫原性ELISA检测 | 第64页 |
| 3．4．1 实验材料及溶液配置 | 第64页 |
| 3．4．2 实验方法 | 第64页 |
| 3．4．2．1 实验思路 | 第64页 |
| 3．4．2．2 ELISA方法 | 第64页 |
| 3．4．3 实验结果 | 第64页 |
| 3．5 融合蛋白pET32a-2020-LTB-2020-STI的STI毒性测定 | 第64-65页 |
| 3．5．1 实验材料 | 第64页 |
| 3．5．2 实验方法 | 第64-65页 |
| 3．5．3 实验步骤 | 第65页 |
| 3．5．4 实验结果 | 第65页 |
| 3．6 大肠杆菌强毒株攻击免疫动物实验 | 第65-66页 |
| 3．6．1 实验材料 | 第65页 |
| 3．6．2 实验方法 | 第65-66页 |
| 3．6．2．1 最小致死量测定(MLD) | 第65页 |
| 3．6．2．2 攻击实验 | 第65-66页 |
| 3．6．3 实验结果 | 第66页 |
| 3．7 免疫动物血清对STI毒素的中和实验 | 第66-67页 |
| 3．7．1 实验材料 | 第66页 |
| 3．7．2 实验方法 | 第66-67页 |
| 3．7．2．1 STI一个鼠活性单位测定 | 第66页 |
| 3．7．2．2 中和实验 | 第66-67页 |
| 3．7．3 实验结果 | 第67页 |
| 3．7．3．1 STI一个鼠活性单位测定 | 第67页 |
| 3．7．3．2 免疫血清中和STI实验 | 第67页 |
| 3．8 细胞中和实验测定免疫动物血清抗口蹄疫病毒滴度 | 第67-68页 |
| 3．8．1 实验材料 | 第67页 |
| 3．8．2 实验方法 | 第67页 |
| 3．8．3 实验结果 | 第67-68页 |
| 3．9 乳鼠保护实验 | 第68-69页 |
| 3．9．1 实验材料及动物 | 第68页 |
| 3．9．2 实验方法 | 第68页 |
| 3．9．3 实验结果 | 第68-69页 |
| 3．10 豚鼠T淋巴细胞增值实验 | 第69-71页 |
| 3．10．1 实验材料及溶液配置 | 第69页 |
| 3．10．2 实验方法 | 第69-70页 |
| 3．10．2．1 实验原理 | 第69-70页 |
| 3．10．2．2 FMDV抗原制备 | 第70页 |
| 3．10．2．3 XTT方法测定免疫豚鼠T淋巴细胞增值 | 第70页 |
| 3．10．3 实验结果 | 第70-71页 |
| 3．11 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
