| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 注释表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| ·聚乙二醇衍生物的分类 | 第9-11页 |
| ·按活化方式的分类 | 第9-10页 |
| ·按端基的电性分类 | 第10页 |
| ·按链结构形状分类 | 第10-11页 |
| ·常用的聚乙二醇衍生物及其性能评价 | 第11-12页 |
| ·聚乙二醇衍生物的应用 | 第12-17页 |
| ·在非病毒基因载体方面的应用 | 第12-13页 |
| ·在药物控释和靶向方面的应用 | 第13页 |
| ·在蛋白质化学修饰方面的应用 | 第13-17页 |
| ·蛋白质化学修饰概述 | 第13-14页 |
| ·蛋白质的PEG化 | 第14-17页 |
| ·原理和方法 | 第14-16页 |
| ·蛋白质PEG化的发展阶段 | 第16-17页 |
| ·本章小节 | 第17-18页 |
| ·本论文研究内容 | 第18-19页 |
| 2 聚乙二醇衍生物的合成 | 第19-38页 |
| ·实验试剂与仪器 | 第19-21页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-27页 |
| ·线性可降解的单甲氧基聚乙二醇衍生物(mPEG—SS)的合成 | 第21-22页 |
| ·mPEG与丁二酸酐的羧化反应 | 第21页 |
| ·羧化的聚乙二醇的活化 | 第21-22页 |
| ·线性可降解的聚乙二醇衍生物(PEG—SS)的合成 | 第22页 |
| ·线性难降解的单甲氧基聚乙二醇衍生物(mPEG—CS)的合成 | 第22-24页 |
| ·溴乙酸乙酯的合成 | 第22页 |
| ·羧甲基化的单甲氧基聚乙二醇的合成 | 第22-23页 |
| ·叔丁醇钾法 | 第22-23页 |
| ·二氧化锰和双氧水氧化法 | 第23页 |
| ·醇钠法 | 第23页 |
| ·羧甲基聚乙二醇的活化 | 第23-24页 |
| ·分枝型聚乙二醇衍生物的合成 | 第24-27页 |
| ·赖氨酸乙酯盐酸盐法 | 第24-25页 |
| ·干燥氯化氢气体的制备 | 第24页 |
| ·赖氨酸乙酯盐酸盐的制备 | 第24页 |
| ·羧甲基化的单甲氧基聚乙二醇的制备 | 第24页 |
| ·分枝型PEG的合成 | 第24-25页 |
| ·凝胶过滤纯化分枝型PEG | 第25页 |
| ·对硝基苯酚氯甲酸酯法(NPC法) | 第25-27页 |
| ·mPEG—NPC的制备 | 第25-26页 |
| ·mPEG—Lys的制备 | 第26页 |
| ·mPEG—Lys—mPEG的制备 | 第26页 |
| ·mPEG—Lys—mPEG的纯化 | 第26-27页 |
| ·分枝型PEG产物的活化 | 第27页 |
| ·结果与讨论 | 第27-37页 |
| ·各种类型修饰剂的设计思路 | 第27-28页 |
| ·PEG-SS及mPEG-SS合成分析及红外谱图 | 第28-30页 |
| ·合成分析 | 第28页 |
| ·产物红外谱图 | 第28-30页 |
| ·mPEG-CS的合成分析和红外谱图 | 第30-31页 |
| ·合成分析 | 第30-31页 |
| ·产物红外谱图 | 第31页 |
| ·分枝型聚乙二醇BmPEG的合成分析及产物表征 | 第31-37页 |
| ·赖氨酸乙酯盐酸盐法合成分析及产物表征 | 第31-35页 |
| ·对硝基苯酚氯甲酸酯法合成分析及产物表征 | 第35-37页 |
| ·本章小节 | 第37-38页 |
| 3 胰蛋白酶的化学修饰 | 第38-56页 |
| ·胰蛋白酶简介 | 第38-39页 |
| ·试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·实验试剂 | 第39页 |
| ·实验仪器 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·胰蛋白酶的修饰反应 | 第40-41页 |
| ·修饰酶的纯化 | 第41页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第41-42页 |
| ·试剂配制 | 第41页 |
| ·标准曲线 | 第41-42页 |
| ·测定修饰酶的浓度 | 第42页 |
| ·胰蛋白酶修饰化度的衡量 | 第42-43页 |
| ·胰蛋白酶酶活的测定 | 第43页 |
| ·溶液的配制 | 第43页 |
| ·酶活的测定 | 第43页 |
| ·胰蛋白酶及修饰酶热稳定性的测定 | 第43-44页 |
| ·pH值对胰蛋白酶及修饰酶活性的影响 | 第44-45页 |
| ·配制不同pH值的缓冲溶液 | 第44页 |
| ·配制不同pH值的底物溶液 | 第44-45页 |
| ·胰蛋白酶与修饰酶活性保留 | 第45页 |
| ·胰蛋白酶及修饰酶K_m值的测定 | 第45-46页 |
| ·米氏常数K_m值的求法 | 第45-46页 |
| ·胰蛋白酶及修饰酶K_m值的具体测定方法 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-54页 |
| ·胰蛋白酶聚乙二醇修饰后修饰化度的结果 | 第46-47页 |
| ·胰蛋白酶修饰前后酶活力的变化 | 第47-48页 |
| ·胰蛋白酶修饰前后热稳定性的变化 | 第48-52页 |
| ·pH值对胰蛋白酶及修饰酶活性的影响 | 第52页 |
| ·胰蛋白酶修饰前后K_m值的变化 | 第52-54页 |
| ·胰蛋白酶修饰前的K_m值 | 第52-53页 |
| ·各种修饰酶的K_m | 第53-54页 |
| ·本章小节 | 第54-56页 |
| 结论 | 第56-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-61页 |
