| 插图和附表清单 | 第1-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-18页 |
| 1．1 1型糖尿病 | 第10-11页 |
| 1．1．1 糖尿病流行状况 | 第10页 |
| 1．1．2 糖尿病的分类 | 第10页 |
| 1．1．3 1型糖尿病 | 第10-11页 |
| 1．2 1型糖尿病的传统治疗研究 | 第11-12页 |
| 1．2．1 异体、异种移植治疗 | 第11页 |
| 1．2．2 药物治疗 | 第11页 |
| 1．2．3 疫苗治疗研究 | 第11页 |
| 1．2．4 基因免疫治疗 | 第11-12页 |
| 1．2．5 细胞治疗 | 第12页 |
| 1．3 口服胰岛素诱导免疫耐受 | 第12-14页 |
| 1．3．1 口服抗原诱导免疫耐受的机制 | 第12-13页 |
| 1．3．2 旁路抑制机制 | 第13页 |
| 1．3．3 口服胰岛素诱导免疫耐受研究进展 | 第13页 |
| 1．3．4 佐剂 | 第13-14页 |
| 1．4 CTB治疗自身免疫性疾病 | 第14-15页 |
| 1．5 转基因植物疫苗 | 第15-18页 |
| 1．5．1 转基因植物疫苗的优越性 | 第15-16页 |
| 1．5．2 利用转基因植物研究1型糖尿病口服疫苗 | 第16-18页 |
| 第二章 CTB-PROIN和CTB-INSB融合基因构建及其在大肠杆菌和植物中的表达 | 第18-55页 |
| 第一部分 CTB-PROIN和CTB-INSB融合基因构建及其在大肠杆菌中的表达 | 第18-36页 |
| 2．1 材料和方法 | 第18-25页 |
| 2．1．1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2．1．1．1 菌株和质粒 | 第18-19页 |
| 2．1．1．2 工具酶与生物学试剂 | 第19页 |
| 2．1．2 实验仪器 | 第19页 |
| 2．1．3 实验中所用的溶液、缓冲液、培养基 | 第19页 |
| 2．1．4 实验方法 | 第19-25页 |
| 2．1．4．1 质粒DNA的小量制备 | 第19-20页 |
| 2．1．4．2 PCR扩增基因片段 | 第20-21页 |
| 2．1．4．3 TBE-agarose电泳和DNA片段的回收(透析袋电洗脱法) | 第21页 |
| 2．1．4．4 大肠杆菌菌株DH5α感受态的制备与转化 | 第21页 |
| 2．1．4．5 DNA的限制性酶切反应和DNA片段连接反应 | 第21页 |
| 2．1．4．6 DNA序列测定 | 第21页 |
| 2．1．4．7 重组蛋白的诱导表达 | 第21-22页 |
| 2．1．4．8 大肠杆菌表达重组包涵体蛋白的纯化 | 第22页 |
| 2．1．4．9 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第22-23页 |
| 2．1．4．10 SDS聚丙烯酰胺凝胶染色 | 第23-24页 |
| 2．1．4．11 Western印迹 | 第24页 |
| 2．1．4．12 GM1 ELISA | 第24-25页 |
| 2．2 实验结果 | 第25-34页 |
| 2．2．1 CTB-PROIN融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析 | 第25-30页 |
| 2．2．1．1 CTB-PROIN融合基因的克隆及序列测定 | 第25-26页 |
| 2．2．1．2 CTB-PROIN融合基因原核表达载体构建与鉴定 | 第26-27页 |
| 2．2．1．3 CTB-PROIN融合基因的诱导表达及表达量测定 | 第27-28页 |
| 2．2．1．4 CTB-PRON融合蛋白的Western blotting检测 | 第28-29页 |
| 2．2．1．5 CTB-PROIN融合蛋白的体外生物活性分析 | 第29-30页 |
| 2．2．2 CTB-INSB融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析 | 第30-34页 |
| 2．2．2．1 CTB-INSB融合基因的克隆及序列测定 | 第30页 |
| 2．2．2．2 CTB-INSB融合基因原核表达载体构建与鉴定 | 第30-32页 |
| 2．2．2．3 CTB-INSB融合基因的诱导表达及纯化 | 第32页 |
| 2．2．2．4 CTB-INSB融合蛋白的Western blotting检测 | 第32-34页 |
| 2．2．2．5 CTB-INSB融合蛋白与GM1神经节苷脂的结合 | 第34页 |
| 2．3 讨论 | 第34-36页 |
| 第二部分 CTB-PROIN和CTB-INSB融合基因在转基因马铃薯中的表达 | 第36-55页 |
| 3．1 材料和方法 | 第36-42页 |
| 3．1．1 实验材料 | 第36-37页 |
| 3．1．1．1 菌株和质粒 | 第36-37页 |
| 3．1．1．2 植物材料 | 第37页 |
| 3．1．1．3 工具酶与生物学试剂 | 第37页 |
| 3．1．2 实验器材 | 第37页 |
| 3．1．3 实验中所用的溶液、缓冲液、培养基 | 第37页 |
| 3．1．4 实验方法 | 第37-42页 |
| 3．1．4．1 质粒DNA的小量制备 | 第37页 |
| 3．1．4．2 PCR扩增基因片段 | 第37-38页 |
| 3．1．4．3 TBE-agarose电泳和DNA片段的回收(透析袋电洗脱法) | 第38页 |
| 3．1．4．4 大肠杆菌菌株DH5α感受态的制备与转化 | 第38页 |
| 3．1．4．5 DNA的限制性酶切反应和DNA片段连接反应 | 第38页 |
| 3．1．4．6 DNA序列测定 | 第38页 |
| 3．1．4．7 根癌农杆菌的三亲杂交 | 第38-39页 |
| 3．1．4．8 转基因植物材料的准备 | 第39页 |
| 3．1．4．9 植物的遗传转化 | 第39-40页 |
| 3．1．4．10 转基因植株的分子鉴定 | 第40-41页 |
| 3．1．4．11 植物表达重组蛋白的提取 | 第41页 |
| 3．1．4．12 转基因植株表达量检测 | 第41页 |
| 3．1．4．13 植物表达重组蛋白的Western blotting检测 | 第41页 |
| 3．1．4．14 植物表达重组蛋白的GM1-ELISA检测 | 第41-42页 |
| 3．2 实验结果 | 第42-53页 |
| 3．2．1 CTB-PROIN融合基因植物表达载体构建及其在马铃薯中的表达 | 第42-48页 |
| 3．2．1．1 CTB-PROIN融合基因植物表达载体设计与基因克隆 | 第42页 |
| 3．2．1．2 CTB-PROINS融合基因植物表达载体构建及鉴定 | 第42-43页 |
| 3．2．1．3 含融合基因CTB-PROINS的农杆菌的获得 | 第43-45页 |
| 3．2．1．4 含融合基因CTB-PROINS的转基因马铃薯的获得及检测 | 第45-46页 |
| 3．2．1．5 CTB-PROINS转基因马铃薯表达量检测 | 第46-47页 |
| 3．2．1．6 CTB-PROINS转基因马铃薯的western blotting检测 | 第47-48页 |
| 3．2．1．7 CTB-PROINS转基因马铃薯的GM1-ELISA检测 | 第48页 |
| 3．2．2 CTB-INSB融合基因植物表达载体构建及其在马铃薯中的表达 | 第48-53页 |
| 3．2．2．1 CTB-INSB融合基因植物表达载体设计与基因克隆 | 第48-49页 |
| 3．2．2．2 CTB-INSB融合基因植物表达载体构建及鉴定 | 第49页 |
| 3．2．2．3 含融合基因CTB-INSB的农杆菌的获得 | 第49-50页 |
| 3．2．2．4 含融合基因CTB-INSB的转基因马铃薯的获得及检测 | 第50-51页 |
| 3．2．2．5 CTB-INSB转基因马铃薯表达量检测 | 第51页 |
| 3．2．2．6 CTB-INSB转基因马铃薯的western blotting检测 | 第51-52页 |
| 3．2．2．7 CTB-INSB转基因马铃薯的GM1-ELISA检测 | 第52-53页 |
| 3．3 讨论 | 第53-55页 |
| 第三章 结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-65页 |
| 溶液、缓冲液、培养基配方 | 第62-65页 |
