| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1． 绿色荧光蛋白的研究进展 | 第12-23页 |
| 1．1 绿色荧光蛋白的结构 | 第12-14页 |
| 1．2 绿色荧光蛋白的发光机制及光谱特性 | 第14-15页 |
| 1．3 绿色荧光蛋白的稳定性 | 第15-16页 |
| 1．4 绿色荧光蛋白在生物技术中的应用 | 第16-23页 |
| 1．4．1 分子标记 | 第16-19页 |
| 1．4．1．1 在基因工程中作为筛选标记 | 第17页 |
| 1．4．1．2 转基因动物研究中的报告分子 | 第17-18页 |
| 1．4．1．3 细胞内蛋白质的定位研究 | 第18-19页 |
| 1．4．2 生物传感器 | 第19页 |
| 1．4．3 药物筛选 | 第19-21页 |
| 1．4．4 基因表达的定量分析 | 第21页 |
| 1．4．5 新型免疫标记物 | 第21-23页 |
| 2． 金黄色葡萄球菌蛋白 A的研究进展 | 第23-25页 |
| 3． 本课题研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 蛋白A-增强型绿色荧光蛋白融合基因原核表达载体的构建 | 第26-40页 |
| 1． 实验材料和仪器 | 第26-28页 |
| 1．1 菌种及质粒 | 第26页 |
| 1．2 酶 | 第26页 |
| 1．3 缓冲液及其他溶液 | 第26-27页 |
| 1．4 培养基 | 第27页 |
| 1．5 主要试剂及商品 | 第27-28页 |
| 1．6 主要仪器 | 第28页 |
| 2． 方法 | 第28-33页 |
| 2．1 质粒的提取与纯化 | 第28-29页 |
| 2．2 E．coli感受态细胞的制备及转化(CaCl_2法) | 第29-30页 |
| 2．3 琼脂糖水平平板凝胶电泳 | 第30页 |
| 2．4 琼脂糖凝胶纯化 DNA | 第30-31页 |
| 2．5 PCR反应 | 第31-32页 |
| 2．6 PCR产物克隆与测序 | 第32页 |
| 2．7 DNA的酶切及连接 | 第32-33页 |
| 2．8 载体的构建 | 第33页 |
| 2．9 阳性克隆的筛选 | 第33页 |
| 3． 结果 | 第33-38页 |
| 3．1 目的基因片断的获得 | 第33-34页 |
| 3．2 载体的构建 | 第34-38页 |
| 4． 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 蛋白A-增强型绿色荧光蛋白融合基因在大肠杆菌中的表达 | 第40-57页 |
| 1． 实验材料和仪器 | 第40-43页 |
| 1．1 表达菌株 | 第40页 |
| 1．2 缓冲液及其他溶液 | 第40-42页 |
| 1．3 培养基 | 第42页 |
| 1．4 主要试剂及商品来源 | 第42-43页 |
| 1．5 主要仪器 | 第43页 |
| 2． 方法 | 第43-47页 |
| 2．1 PA-EGFP融合蛋白的表达 | 第43-44页 |
| 2．1．1 表达菌株的筛选 | 第43页 |
| 2．1．2 PA-EGFP融合蛋白的试表达 | 第43-44页 |
| 2．1．3 PA-EGFP融合蛋白的大规模表达 | 第44页 |
| 2．1．4 目的蛋白质在培养基及细胞内的定位 | 第44页 |
| 2．2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44页 |
| 2．3 PA-EGFP融合蛋白的提取及纯化 | 第44-46页 |
| 2．3．1 培养上清中目的蛋白质的提取 | 第44-45页 |
| 2．3．2 周质腔蛋白质渗透性释放 | 第45页 |
| 2．3．3 使用 HisTrap Chelating HP纯化蛋白质 | 第45-46页 |
| 2．4 PA-EGFP融合蛋白的荧光光谱测定 | 第46页 |
| 2．5 PA-EGFP融合蛋白的生物学活性测定 | 第46-47页 |
| 2．5．1 PA-EGFP融合蛋白的荧光活性 | 第46页 |
| 2．5．2 PA-EGFP融合蛋白的免疫学活性 | 第46-47页 |
| 3． 结果 | 第47-54页 |
| 3．1 PA-EGFP融合蛋白的表达 | 第47-48页 |
| 3．2 PA-EGFP融合蛋白在培养基及细胞内的定位 | 第48-50页 |
| 3．3 PA-EGFP融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 3．4 PA-EGFP融合蛋白的荧光光谱 | 第51-52页 |
| 3．5 PA-EGFP融合蛋白生物学活性 | 第52-54页 |
| 3．5．1 PA-EGFP融合蛋白的荧光活性 | 第52-53页 |
| 3．5．2 PA-EGFP融合蛋白的免疫学活性 | 第53-54页 |
| 4． 讨论 | 第54-57页 |
| 第四章 蛋白A-增强型绿色荧光蛋白融合基因在大肠杆菌中表达条件的优化 | 第57-65页 |
| 1． 实验材料和仪器 | 第57-58页 |
| 1．1 表达菌株 | 第57页 |
| 1．2 缓冲液及主要试剂 | 第57页 |
| 1．3 培养基 | 第57页 |
| 1．4 主要仪器 | 第57-58页 |
| 2． 方法 | 第58-59页 |
| 2．1 PA-EGFP融合蛋白的荧光定量 | 第58-59页 |
| 2．1．1 PA-EGFP融合蛋白浓度的确定 | 第58页 |
| 2．1．2 PA-EGFP融合蛋白荧光标准曲线的建立 | 第58-59页 |
| 2．2 PA-EGFP融合蛋白表达条件的优化 | 第59页 |
| 3． 结果 | 第59-63页 |
| 3．1 PA-EGFP融合蛋白荧光标准曲线 | 第59-60页 |
| 3．2 PA-EGFP融合蛋白表达条件的优化 | 第60-63页 |
| 3．2．1 不同培养基对 PA-EGFP在 E．coli中分泌表达的影响 | 第60-62页 |
| 3．2．2 蔗糖、Triton X-100和甘氨酸对 PA-EGFP分泌表达的影响 | 第62-63页 |
| 3．2．3 结论 | 第63页 |
| 4． 讨论 | 第63-65页 |
| 第五章 蛋白A-增强型绿色荧光蛋白融合蛋白在免疫测定中的应用 | 第65-70页 |
| 1． 实验材料和仪器 | 第65-66页 |
| 1．1 实验材料 | 第65页 |
| 1．2 缓冲液及其他溶液 | 第65页 |
| 1．3 主要试剂及商品 | 第65页 |
| 1．4 主要仪器 | 第65-66页 |
| 2． 方法 | 第66-67页 |
| 2．1 PA-EGFP融合蛋白在免疫酶斑点检测中的应用 | 第66-67页 |
| 2．1．1 protein A-HRP对照实验 | 第66页 |
| 2．1．2 PA-EGFP融合蛋白检测 | 第66-67页 |
| 2．2 PA-EGFP融合蛋白在免疫细胞化学中的应用 | 第67页 |
| 2．2．1 PA-EGFP融合蛋白标记显示试验 | 第67页 |
| 3． 结果 | 第67-69页 |
| 3．1 PA-EGFP融合蛋白在免疫酶斑点检测中的应用 | 第67-68页 |
| 3．2 PA-EGFP融合蛋白在免疫细胞化学中的应用 | 第68-69页 |
| 4． 讨论 | 第69-70页 |
| 论文总结 | 第70-72页 |
| 附录 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第85页 |
