| 第一部分:通过基因工程技术培育高产优质水稻品系——利用根癌农杆菌介导的多基因转化技术培育高产水稻株系并通过cre-lox 系统去除其中的标记基因 | 第1-90页 |
| 论文中文摘要 | 第8-9页 |
| 论文英文摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 综述:根癌农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第11-33页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 农杆菌介导水稻遗传转化研究的回顾 | 第12-16页 |
| ·摸索阶段 | 第12-13页 |
| ·技术突破和成熟阶段 | 第13-14页 |
| ·应用阶段 | 第14-16页 |
| 2 影响农杆菌转化水稻的几个关键因素 | 第16-20页 |
| ·转化受体 | 第16-17页 |
| ·Vir 基因诱导物 | 第17-18页 |
| ·农杆菌菌株及载体系统 | 第18页 |
| ·培养基和激素 | 第18-19页 |
| ·启动子 | 第19页 |
| ·筛选剂 | 第19-20页 |
| 3 前景展望 | 第20-23页 |
| ·标记基因的去除或改造 | 第20-21页 |
| ·整株转化 | 第21-22页 |
| ·多基因转化 | 第22页 |
| ·定向转化 | 第22-23页 |
| 结束语 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-33页 |
| 第二章 通过根癌农杆菌介导的水稻多基因转化技术实现水稻产量提高和除草剂抗性的获得 | 第33-69页 |
| 引言 | 第33-35页 |
| 材料和方法 | 第35-54页 |
| 1 酶及生化试剂 | 第35-36页 |
| 2 水稻组织培养和遗传转化所用的培养基 | 第36页 |
| 3 细菌培养基 | 第36-37页 |
| 4 质粒和菌株 | 第37-39页 |
| 5 质粒 DNA 的提取、鉴定和转化 | 第39-43页 |
| 6 植物材料 | 第43页 |
| 7 根癌农杆菌介导的水稻遗传转化和转基因水稻植株的再生 | 第43-44页 |
| 8 水稻叶片总 DNA 的微量和大量提取 | 第44-46页 |
| 9 聚合酶链式反应(PCR)分析 | 第46页 |
| 10 Southern blot 分析 | 第46-51页 |
| 11 水稻总 RNA 的提取 | 第51页 |
| 12 Northern blot 分析 | 第51-52页 |
| 13 潮霉素筛选 | 第52-53页 |
| 14 GUS 活性的组织化学鉴定 | 第53页 |
| 15 除草剂抗性测试 | 第53页 |
| 16 转基因在后代出现分离的鉴定(半粒种子测试) | 第53-54页 |
| 17 转基因植株的表型分析 | 第54页 |
| 结果与讨论 | 第54-61页 |
| 1 产生大量表型正常并且可育的转基因水稻植株 | 第54-55页 |
| 2 外源基因的稳定整合 | 第55-57页 |
| 3 外源基因的稳定表达和遗传 | 第57-60页 |
| 4 转基因水稻株系的表型改良和产量提高 | 第60-61页 |
| 讨论 | 第61-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 第三章 利用能够穿透细胞膜的Cre重组酶切除转基因水稻中的筛选标记以及报告基因 | 第69-90页 |
| 引言 | 第69-71页 |
| 材料和方法 | 第71-78页 |
| 1 酶及生化试剂 | 第71页 |
| 2 细菌培养基 | 第71页 |
| 3 水稻组织培养和遗传转化所用的培养基 | 第71页 |
| 4 质粒和菌株 | 第71-72页 |
| 5 质粒 DNA 的提取、鉴定和转化 | 第72页 |
| 6 植物材料 | 第72页 |
| 7 根癌农杆菌介导的水稻遗传转化和转基因水稻植株的再生 | 第72页 |
| 8 水稻叶片总 DNA 的微量和大量提取 | 第72页 |
| 9 聚合酶链式反应(PCR)分析 | 第72页 |
| 10 Southern blot 分析(使用地高辛-高效随机引物 DNA 标记和检测试剂盒Ⅱ) | 第72页 |
| 11 潮霉素筛选 | 第72-73页 |
| 12 GUS 活性的组织化学鉴定 | 第73页 |
| 13 经 EHA105/pYP1203E 转化的转基因水稻植株的外源基因拷贝数的确定 | 第73页 |
| 14 穿膜重组酶 Cre 蛋白Hi56-NLS-Cre-MTS 的表达和纯化 | 第73-75页 |
| 15. 水稻细胞培养 | 第75-76页 |
| 16 水稻愈伤组织的预处理 | 第76页 |
| 17 融合蛋白Hi56-NLS-Cre-MTS处理水稻细胞和水稻植株的再生 | 第76页 |
| 18 检测水稻细胞中融合蛋白Hi56-NLS-Cre-MTS介导的DNA重组 | 第76-78页 |
| 结果 | 第78-84页 |
| 1 水稻遗传转化质粒pYF5091 的构建和质粒转化根癌农杆菌 EHA105 | 第78-79页 |
| 2 转基因植株(QiufengloxP)的产生 | 第79-80页 |
| 3 融合蛋白Hi56-NLS-Cre-MTS 介导的水稻细胞中的位点特异性重组和无筛选标记基因的转基因植株的产生 | 第80-84页 |
| 讨论 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-90页 |
| 论文第二部分草坪型多年生黑麦草(Lolium perenne)和高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)高效再生体系和根癌农杆菌介导的遗传转化体系的建立 | 第90-110页 |
| 论文中文摘要 | 第91-92页 |
| 论文英文摘要 | 第92-94页 |
| 引言 | 第94-95页 |
| 材料和方法 | 第95-100页 |
| 1 酶及生化试剂 | 第95-96页 |
| 2 草坪草组织培养和遗传转化所用的培养基 | 第96页 |
| 3 细菌培养基 | 第96页 |
| 4 质粒和菌株 | 第96-97页 |
| 5 质粒 DNA 的提取、鉴定和转化 | 第97页 |
| 6 植物材料 | 第97-98页 |
| 7 根癌农杆菌介导的多年生黑麦草和高羊茅遗传转化和转基因植株的再生 | 第98-99页 |
| 8 多年生黑麦草和高羊茅叶片总 DNA 的微量和大量提取 | 第99页 |
| 9 聚合酶链式反应(PCR)分析 | 第99-100页 |
| 10 Southern blot 分析 | 第100页 |
| 11 GUS 活性的组织化学鉴定 | 第100页 |
| 结果与讨论 | 第100-110页 |
| 1 建立高效的多年生黑麦草和高羊茅的愈伤组织诱导和绿苗再生体系 | 第100-103页 |
| ·成熟种子的不同预处理方式对愈伤组织诱导和植株再生的影响 | 第101-102页 |
| ·基本培养基、pH 值和硅酸钠组分对愈伤组织的诱导和植株再生的影响 | 第102-103页 |
| 2 建立根癌农杆菌介导的多年生黑麦草和高羊茅的高效遗传转化体系 | 第103-110页 |
| ·遗传转化受体 | 第103-104页 |
| ·根癌农杆菌的感染条件以及共培养条件 | 第104-105页 |
| ·恢复培养中的抗氧化剂的应用 | 第105页 |
| ·筛选流程对遗传转化的作用 | 第105-106页 |
| ·抗性苗的GUS组织化学鉴定 | 第106-107页 |
| ·外源基因整合进多年生黑麦草和高羊茅基因组 | 第107-110页 |
| 参考文献 | 第110-113页 |
| 总结和展望 | 第113-116页 |
| 发表文章目录 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117页 |
