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双肌臀大白猪肌肉组织差异表达基因的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-11页
第一章 文献综述第11-28页
 1 肌肉过度发育的研究进展第11-17页
   ·肌肉生长发育的过程第11页
   ·肌肉过度发育的机理研究第11-12页
   ·肌肉过度发育的分子机理研究第12-16页
   ·双肌性状的研究进展第16-17页
 2 基因差异表达的研究方法第17-27页
   ·差别筛选(Differential Screening)第18页
   ·消减杂交(Subtractive Hybridization)第18-19页
   ·mRNA差异显示技术(Differential Display RT-PCR, DD RT-PCR)第19-20页
   ·RNA任意引物PCR(RNA arbitrarily primed PCR, RAP PCR)第20-21页
   ·代表性差示分析(Representational Differential Analysis, RDA)第21-22页
   ·基因表达的系列分析(Serial analysis of gene expression, SAGE)第22页
   ·抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization, SSH)第22-25页
   ·交互扣除RNA差别显示技术(RSDD)第25-26页
   ·差异消减展示(Differential subtraction display, DSD)第26页
   ·cDNA芯片技术第26-27页
 3 研究意义第27-28页
第二章 材料与方法第28-51页
 1 实验材料第28-29页
   ·实验动物第28页
   ·采样方案第28页
   ·样品采集注意事项第28-29页
 2 实验方法第29-51页
   ·实验药品第29页
   ·试剂的配制第29-30页
   ·主要仪器设备第30-31页
   ·总RNA的提取第31-32页
   ·总RNA的纯化第32-33页
   ·总RNA池的建立第33页
   ·Poly A~+ RNA的分离与纯化第33-34页
   ·RNA的一链合成第34页
   ·抑制消减杂交第34-41页
   ·消减cDNA文库的构建第41-42页
   ·消减cDNA文库的差异筛选第42-45页
   ·cDNA文库的测序、序列分析及文库功能聚类分析第45页
   ·重组质粒DNA的小量提取第45-46页
   ·PCR产物凝胶回收方法第46-47页
   ·测序反应第47-48页
   ·Northern杂交第48-49页
   ·荧光定量PCR验证第49-51页
第三章 结果与分析第51-66页
 1 实验猪体尺数据的分析第51页
 2 筛选双肌臀性状的假定模型第51-52页
 3 RNA的提取、纯化与mRNA的分离第52-54页
   ·总RNA的提取第52页
   ·总RNA的纯化第52-53页
   ·mRNA的分离与纯化第53-54页
 4 抑制性消减杂交第54-57页
   ·ds cDNA合成和RsaⅠ酶切效果的检测第54页
   ·接头连接效率的检测第54-55页
   ·PCR扩增产物分析第55页
   ·消减效率的检测第55-57页
 5 消减cDNA文库的构建第57页
 6 消减文库的全文库测序与分析第57-58页
 7 消减文库比对结果的聚类分析第58页
 8 消减文库的差异筛选第58-60页
 9 测序结果与差异筛选的综合分析第60-61页
 10 总RNA的Northern杂交第61-62页
 11 荧光定量PCR检测第62-66页
第四章 讨论第66-71页
   ·双肌臀猪标准制定的问题第66页
   ·抑制消减杂交的缺点对本研究的影响第66-67页
   ·差异表达基因的探讨第67-70页
   ·消减cDNA文库假阳性问题第70-71页
第五章 结论第71-73页
   ·消减cDNA文库的构建与差异筛选第71页
   ·文库测序结果与分析第71页
   ·测序与差异筛选综合分析第71-72页
   ·Northern杂交和定量PCR验证第72-73页
参考文献第73-79页
附录1 文库序列BLAST分析结果第79-97页
附录2 消减文库中的全新EST序列第97-101页
附录3 分析软件及网站第101-102页
附录4 消减cDNA文库的功能聚类分析第102-104页
缩略词第104-105页
致谢第105-107页

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