摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-28页 |
1 肌肉过度发育的研究进展 | 第11-17页 |
·肌肉生长发育的过程 | 第11页 |
·肌肉过度发育的机理研究 | 第11-12页 |
·肌肉过度发育的分子机理研究 | 第12-16页 |
·双肌性状的研究进展 | 第16-17页 |
2 基因差异表达的研究方法 | 第17-27页 |
·差别筛选(Differential Screening) | 第18页 |
·消减杂交(Subtractive Hybridization) | 第18-19页 |
·mRNA差异显示技术(Differential Display RT-PCR, DD RT-PCR) | 第19-20页 |
·RNA任意引物PCR(RNA arbitrarily primed PCR, RAP PCR) | 第20-21页 |
·代表性差示分析(Representational Differential Analysis, RDA) | 第21-22页 |
·基因表达的系列分析(Serial analysis of gene expression, SAGE) | 第22页 |
·抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization, SSH) | 第22-25页 |
·交互扣除RNA差别显示技术(RSDD) | 第25-26页 |
·差异消减展示(Differential subtraction display, DSD) | 第26页 |
·cDNA芯片技术 | 第26-27页 |
3 研究意义 | 第27-28页 |
第二章 材料与方法 | 第28-51页 |
1 实验材料 | 第28-29页 |
·实验动物 | 第28页 |
·采样方案 | 第28页 |
·样品采集注意事项 | 第28-29页 |
2 实验方法 | 第29-51页 |
·实验药品 | 第29页 |
·试剂的配制 | 第29-30页 |
·主要仪器设备 | 第30-31页 |
·总RNA的提取 | 第31-32页 |
·总RNA的纯化 | 第32-33页 |
·总RNA池的建立 | 第33页 |
·Poly A~+ RNA的分离与纯化 | 第33-34页 |
·RNA的一链合成 | 第34页 |
·抑制消减杂交 | 第34-41页 |
·消减cDNA文库的构建 | 第41-42页 |
·消减cDNA文库的差异筛选 | 第42-45页 |
·cDNA文库的测序、序列分析及文库功能聚类分析 | 第45页 |
·重组质粒DNA的小量提取 | 第45-46页 |
·PCR产物凝胶回收方法 | 第46-47页 |
·测序反应 | 第47-48页 |
·Northern杂交 | 第48-49页 |
·荧光定量PCR验证 | 第49-51页 |
第三章 结果与分析 | 第51-66页 |
1 实验猪体尺数据的分析 | 第51页 |
2 筛选双肌臀性状的假定模型 | 第51-52页 |
3 RNA的提取、纯化与mRNA的分离 | 第52-54页 |
·总RNA的提取 | 第52页 |
·总RNA的纯化 | 第52-53页 |
·mRNA的分离与纯化 | 第53-54页 |
4 抑制性消减杂交 | 第54-57页 |
·ds cDNA合成和RsaⅠ酶切效果的检测 | 第54页 |
·接头连接效率的检测 | 第54-55页 |
·PCR扩增产物分析 | 第55页 |
·消减效率的检测 | 第55-57页 |
5 消减cDNA文库的构建 | 第57页 |
6 消减文库的全文库测序与分析 | 第57-58页 |
7 消减文库比对结果的聚类分析 | 第58页 |
8 消减文库的差异筛选 | 第58-60页 |
9 测序结果与差异筛选的综合分析 | 第60-61页 |
10 总RNA的Northern杂交 | 第61-62页 |
11 荧光定量PCR检测 | 第62-66页 |
第四章 讨论 | 第66-71页 |
·双肌臀猪标准制定的问题 | 第66页 |
·抑制消减杂交的缺点对本研究的影响 | 第66-67页 |
·差异表达基因的探讨 | 第67-70页 |
·消减cDNA文库假阳性问题 | 第70-71页 |
第五章 结论 | 第71-73页 |
·消减cDNA文库的构建与差异筛选 | 第71页 |
·文库测序结果与分析 | 第71页 |
·测序与差异筛选综合分析 | 第71-72页 |
·Northern杂交和定量PCR验证 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-79页 |
附录1 文库序列BLAST分析结果 | 第79-97页 |
附录2 消减文库中的全新EST序列 | 第97-101页 |
附录3 分析软件及网站 | 第101-102页 |
附录4 消减cDNA文库的功能聚类分析 | 第102-104页 |
缩略词 | 第104-105页 |
致谢 | 第105-107页 |