| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第6-8页 |
| 2 材料与方法 | 第8-18页 |
| 2．1 材料 | 第8页 |
| 2．1．1 血样 | 第8页 |
| 2．1．2 试剂 | 第8页 |
| 2．1．3 主要仪器与设备 | 第8页 |
| 2．1．4 朊蛋白(PrP~0)基因参照序列 | 第8页 |
| 2．2 朊蛋白基因的克隆 | 第8-13页 |
| 2．2．1 引物的设计和合成 | 第8-9页 |
| 2．2．2 羊总DNA的提取 | 第9页 |
| 2．2．3 目的基因的PCR扩增 | 第9页 |
| 2．2．4 PCR产物的纯化与回收 | 第9-10页 |
| 3．2．5 目的DNA片段与pMD18-T载体的连接 | 第10页 |
| 2．2．6 感受态细胞的制备 | 第10-11页 |
| 2．2．7 连接产物的转化 | 第11页 |
| 2．2．8 重组质粒的提取与鉴定 | 第11-12页 |
| 2．2．9 重组质粒的测序和序列分析 | 第12-13页 |
| 2．3 绵羊(Ov)rPrP的原核表达 | 第13-18页 |
| 2．3．1 引物设计 | 第13页 |
| 2．3．2 目的片段的扩增 | 第13页 |
| 2．3．3 pGEX-4T-1质粒提取和其与PCR产物酶切片段的回收 | 第13-14页 |
| 2．3．4 重组表达载体的构建与鉴定 | 第14-16页 |
| 2．3．5 重组表达质粒的诱导优化 | 第16页 |
| 2．3．6 表达产物的检测 | 第16-18页 |
| 3 结果 | 第18-25页 |
| 3．1 PCR扩增 | 第18页 |
| 3．2 重组质粒的鉴定 | 第18-19页 |
| 3．2．1 酶切分析 | 第18-19页 |
| 3．2．2 PCR扩增 | 第19页 |
| 3．3 重组表达质粒的鉴定 | 第19页 |
| 3．3．1 酶切分析 | 第19页 |
| 3．3．2 PCR扩增 | 第19页 |
| 3．3．3 测序鉴定 | 第19页 |
| 3．4 表达产物的检测 | 第19-20页 |
| 3．4．1 SDS-PAGE | 第19页 |
| 3．4．2 表达产物的相对表达量 | 第19-20页 |
| 3．4．3 Western blotting | 第20页 |
| 3．5 羊朊蛋白基因测序结果和序列分析 | 第20-25页 |
| 3．5．1 羊朊蛋白基因核苷酸测序结果 | 第20页 |
| 3．5．2 羊朊蛋白基因核苷酸测序和推导氨基酸序列的同源性分析 | 第20-21页 |
| 3．5．3 羊朊蛋白基因突变位点分析 | 第21-25页 |
| 4 讨论 | 第25-31页 |
| 文献综述 | 第31-39页 |
| 参考文献 | 第39-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
