| 中文摘要 | 第1-4页 |
| 英文摘要 | 第4-9页 |
| 1 前言 | 第9-18页 |
| ·细胞色素P450 | 第9-16页 |
| ·细胞色素P450的研究简史 | 第9-11页 |
| ·真菌细胞色素P450nor及其研究进展 | 第11-15页 |
| ·真菌反硝化 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒表达载体系统 | 第16-18页 |
| ·原理 | 第16-17页 |
| ·Bac-to-Bac表达系统 | 第17-18页 |
| 2 实验材料和方法 | 第18-30页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·菌株和质粒 | 第18页 |
| ·野生型病毒和细胞 | 第18页 |
| ·化学试剂及抗菌素 | 第18页 |
| ·常用贮存液 | 第18页 |
| ·限制性内切酶及其它工具酶 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19页 |
| ·常用缓冲液 | 第19-21页 |
| ·Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第22-23页 |
| ·DNA片段的回收 | 第23页 |
| ·DNA片段的连接 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第23-24页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第24页 |
| ·蛋白质的原核表达 | 第24页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| ·Western-blot分析 | 第25页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第25页 |
| ·Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化 | 第25-26页 |
| ·抗体的制备与效价的测定 | 第26-27页 |
| ·MTT方法检测细胞存活数 | 第27页 |
| ·蛋白质与NO含量的测定 | 第27页 |
| ·质粒DNA的转座 | 第27-28页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid DNA(＞100 kb)的提取与制备 | 第28页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid转染Sf9细胞 | 第28-29页 |
| ·PCR检测 | 第29页 |
| ·真核表达产物的SDS-PAGE | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-41页 |
| ·重组原核表达质粒pET-P450nor的构建和表达 | 第30-33页 |
| ·重组表达质粒pET-P450nor的构建 | 第30页 |
| ·重组表达质粒pET-P450nor的鉴定 | 第30页 |
| ·P450nor基因在大肠杆菌E.coli BL21中的表达与鉴定 | 第30-33页 |
| ·原核表达的细胞色素P450nor的分离纯化 | 第33-34页 |
| ·重组细胞色素P450nor的分离纯化 | 第33页 |
| ·重组细胞色素P450nor的纯化效果的鉴定 | 第33-34页 |
| ·抗体效价的测定 | 第34-35页 |
| ·重组P450nor对肿瘤细胞增殖的抑制 | 第35页 |
| ·重组真核表达病毒pAc-P450nor的构建和表达 | 第35-41页 |
| ·重组转移载体pFast-P450nor的构建与酶切鉴定 | 第35-38页 |
| ·重组bacmid的PCR分析 | 第38-39页 |
| ·重组P450nor的表达与免疫学分析 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-46页 |
| ·目的基因的原核高效表达 | 第41-42页 |
| ·表达高效载体的pET | 第41页 |
| ·表达量的优化 | 第41-42页 |
| ·亲和层析 | 第42-43页 |
| ·目的基因对肿瘤细胞生长的抑制 | 第43-44页 |
| ·Bac-to-Bac表达系统的建立及应用 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52页 |
