致谢 | 第1-10页 |
中文摘要 | 第10-13页 |
英文摘要 | 第13-17页 |
第一章 植物过敏性细胞死亡机理的研究进展 | 第17-50页 |
1.1 植物抗病基因介导的抗病性 | 第17-19页 |
1.2 植物HR中细胞死亡和抗病防卫反应的相互独立性 | 第19页 |
1.3 诱导植物HR细胞死亡的信号分子 | 第19-24页 |
1.3.1 钙离子 | 第20页 |
1.3.2 活性氧 | 第20-21页 |
1.3.3 一氧化氮 | 第21-22页 |
1.3.4 水杨酸 | 第22页 |
1.3.5 信号分子之间的相互关系 | 第22-24页 |
1.4 与植物HR细胞死亡信号传导相关的基因 | 第24-29页 |
1.4.1 RAR1基因 | 第25-26页 |
1.4.2 EDS1和NDR1基因 | 第26-27页 |
1.4.3 ACD11基因 | 第27-28页 |
1.4.4 Lls1和LSD1基因 | 第28页 |
1.4.5 其它基因 | 第28-29页 |
1.5 线粒体在植物HR细胞死亡中的作用 | 第29-32页 |
1.5.1 线粒体在动物细胞凋亡中的作用 | 第29-30页 |
1.5.2 线粒体与植物HR细胞死亡的关系 | 第30-32页 |
1.6 植物HR细胞死亡中与凋亡蛋白类似功能的基因 | 第32-33页 |
1.7 植物HR细胞死亡中与caspase类似功能的基因 | 第33-35页 |
1.8 本研究的背景及目标 | 第35-37页 |
参考文献 | 第37-50页 |
第二章 水稻-白叶枯病菌互作中活性氧和NO的产生与细胞死亡的关系 | 第50-71页 |
2.1 材料与方法 | 第50-54页 |
2.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第50-51页 |
2.1.2 供试病原菌 | 第51页 |
2.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第51页 |
2.1.4 细胞死亡的分析 | 第51-52页 |
2.1.5 O_2~(.-)的测定 | 第52页 |
2.1.5.1 细胞色素c法 | 第52页 |
2.1.5.2 XTT法 | 第52页 |
2.1.6 H_2O_2的测定 | 第52-53页 |
2.1.6.1 二甲苯酚橙法 | 第52页 |
2.1.6.2 H_2DCF-DA法 | 第52-53页 |
2.1.7 NO的测定 | 第53页 |
2.1.8 抗氧化酶的提取和活性测定 | 第53-54页 |
2.1.8.1 酶液的提取 | 第53页 |
2.1.8.2 超氧物歧化酶(SOD)的活性测定 | 第53页 |
2.1.8.3 过氧化氢酶(CAT)的活性测定 | 第53页 |
2.1.8.4 过氧化物酶(POD)的活性测定 | 第53-54页 |
2.1.8.5 抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性测定 | 第54页 |
2.1.8.6 酶液中蛋白质浓度的测定 | 第54页 |
2.1.9 抗氧化剂和NO的抑制剂与释放剂的处理 | 第54页 |
2.2 结果与分析 | 第54-64页 |
2.2.1 HR细胞死亡 | 第54-55页 |
2.2.2 接种后水稻细胞活性氧的产生动态 | 第55-58页 |
2.2.2.1 O_2~(.-)的产生动态 | 第55-57页 |
2.2.2.2 H_2O_2的产生动态 | 第57-58页 |
2.2.3 接种后水稻细胞NO产生的变化 | 第58-59页 |
2.2.4 接种后抗氧化酶活性的变化 | 第59-62页 |
2.2.4.1 SOD活性的变化 | 第59页 |
2.2.4.2 CAT活性的变化 | 第59-60页 |
2.2.4.3 POD活性的变化 | 第60页 |
2.2.4.4 APX活性的变化 | 第60-62页 |
2.2.5 抗氧化剂处理后对HR细胞死亡的影响 | 第62页 |
2.2.6 NO抑制剂及释放剂处理对细胞死亡的影响 | 第62-64页 |
2.3 讨论 | 第64-68页 |
2.3.1 水稻与白叶枯病菌互作中活性氧的产生及在HR细胞死亡中的作用 | 第64-66页 |
2.3.2 水稻与白叶枯病菌互作中NO的产生及在HR细胞死亡中的作用 | 第66-68页 |
参考文献 | 第68-71页 |
第三章 水稻-白叶枯病菌互作中活性氧产生的酶机理 | 第71-86页 |
3.1 材料与方法 | 第71-74页 |
3.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第71页 |
3.1.2 供试病原菌 | 第71页 |
3.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第71-72页 |
3.1.4 细胞壁上氧化酶的提取和活性测定 | 第72页 |
3.1.4.1 细胞壁的提取 | 第72页 |
3.1.4.2 二胺氧化酶(DAO)的活性测定 | 第72页 |
3.1.4.3 细胞壁过氧化物酶(CW-POD)的活性测定 | 第72页 |
3.1.4.4 细胞壁NADH过氧化物酶(NADH-POD)的活性测定 | 第72页 |
3.1.4.5 草酸氧化酶的活性测定 | 第72页 |
3.1.5 NADPH氧化酶的提取矛和活性测定 | 第72-73页 |
3.1.6 黄嘌呤氧化酶(XO)的活性测定 | 第73页 |
3.1.7 脂氧合酶(LOX)的活性测定 | 第73页 |
3.1.8 酶液中蛋白质浓度的测定 | 第73页 |
3.1.9 抑制剂处理对活性氧产生和细胞死亡的影响 | 第73-74页 |
3.2 结果与讨论 | 第74-81页 |
3.2.1 接种后DAO活性的变化 | 第74-75页 |
3.2.2 接种后CW-POD活性的变化 | 第75-76页 |
3.2.3 接种后细胞壁NADH-POD活性的变化 | 第76-77页 |
3.2.4 接种后草酸氧化酶活性的变化 | 第77页 |
3.2.5 接种后NADPH氧化酶活性的变化 | 第77-78页 |
3.2.6 接种后XO活性的变化 | 第78-79页 |
3.2.7 接种后LOX活性的变化 | 第79-80页 |
3.2.8 抑制剂处理后对活性氧及细胞死亡的影响 | 第80-81页 |
3.3 讨论 | 第81-84页 |
参考文献 | 第84-86页 |
第四章 线粒体活性氧产生在水稻过敏性细胞死亡中的作用 | 第86-97页 |
4.1 材料与方法 | 第86-87页 |
4.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第86页 |
4.1.2 供试病原菌 | 第86-87页 |
4.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第87页 |
4.1.4 接种后细胞内H_2O_2的测定 | 第87页 |
4.1.5 Mn-SOD的活性测定 | 第87页 |
4.1.6 抑制剂处理对活性氧的产生和细胞死亡的影响 | 第87页 |
4.2 结果与分析 | 第87-93页 |
4.2.1 接种后细胞内H_2O_2产生的变化 | 第87-88页 |
4.2.2 接种后Mn-SOD活性的变化 | 第88页 |
4.2.3 呼吸链抑制剂处理对互作中细胞内H_2O_2产生及细胞死亡的影响 | 第88-90页 |
4.2.4 活性氧清除剂处理对呼吸链抑制剂诱导H_2O_产生及细胞死亡的影响 | 第90-93页 |
4.3 讨论 | 第93-95页 |
参考文献 | 第95-97页 |
第五章 水稻的gp91~(Phox)同源基因OsrbohB的克隆及鉴定 | 第97-111页 |
5.1 材料与方法 | 第98-100页 |
5.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第98页 |
5.1.2 供试病原菌 | 第98页 |
5.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第98页 |
5.1.4 总RNA抽提 | 第98页 |
5.1.5 扩增全长cDNA策略 | 第98-99页 |
5.1.6 DNA测序及序列分析 | 第99页 |
5.1.7 基因表达的RT-PCR分析 | 第99-100页 |
5.2 结果与分析 | 第100-107页 |
5.2.1 一个新的水稻gp91~(phox)同源基因OsrbohB的克隆 | 第100-104页 |
5.2.2 OsrbohB在水稻悬浮细胞及与白叶枯病菌互作中的表达 | 第104-107页 |
5.3 讨论 | 第107-109页 |
参考文献 | 第109-111页 |
第六章 核酸酶活性的变化与水稻过敏性细胞死亡的关系 | 第111-120页 |
6.1 材料与方法 | 第111-113页 |
6.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第111页 |
6.1.2 供试病原菌 | 第111页 |
6.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第111-112页 |
6.1.4 DNA提取和分析 | 第112页 |
6.1.5 单链核酸酶和双链核酸酶的提取及活性测定 | 第112页 |
6.1.6 清除NO和活性氧后对核酸酶活性以及DNA降解的影响 | 第112-113页 |
6.2 结果与分析 | 第113-117页 |
6.2.1 接种后水稻细胞中DNA的变化 | 第113-114页 |
6.2.2 接种后水稻细胞核酸酶活性的变化 | 第114页 |
6.2.3 互作中NO和活性氧等产生对核酸酶活性及DNA降解的影响 | 第114-117页 |
6.3 讨论 | 第117-119页 |
参考文献 | 第119-120页 |
第七章 细胞凋亡相关的某些遗传因子在水稻过敏性细胞死亡中的作用 | 第120-129页 |
7.1 材料与方法 | 第120-121页 |
7.1.1 供试水稻悬浮细胞 | 第120页 |
7.1.2 供试病原菌 | 第120页 |
7.1.3 水稻悬浮细胞接种白叶枯病菌 | 第120-121页 |
7.1.4 总RNA抽提 | 第121页 |
7.1.5 基因表达的RT-PCR分析 | 第121页 |
7.1.6 细胞死亡测定 | 第121页 |
7.1.7 抑制剂处理 | 第121页 |
7.2 结果与分析 | 第121-124页 |
7.2.1 接种后BI-1基因和DAD1基因的表达变化 | 第121-122页 |
7.2.2 PARP在细胞死亡中的作用 | 第122页 |
7.2.3 蛋白酶在细胞死亡中的作用 | 第122-124页 |
7.3 讨论 | 第124-127页 |
参考文献 | 第127-129页 |
全文小结 | 第129-130页 |
附录A 本论文所用缩写词及中英文对照 | 第130-132页 |
附录B 主要化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第132-134页 |
附录C 主要化学试剂及缓冲液配制 | 第134-135页 |
附录D 本论文所用培养基配方 | 第135-136页 |