ABSTRACT | 第1-6页 |
DEDICATION | 第6-7页 |
ACKNOWLEDGMENTS | 第7-8页 |
TABL OF CONTENTS | 第8-12页 |
LIST OF TABLES | 第12-13页 |
LIST OF ILLUSTRATIONS | 第13-15页 |
CHAPTER 1: GENERAL INTRODUCTION | 第15-30页 |
1,1. Replication of retroviruses | 第16-17页 |
1,2. Discovery of reverse transcriptase (RT) | 第17-18页 |
1,3. Processing of reverse transcription | 第18-20页 |
1,4. The structure and function of RT | 第20-23页 |
Avian sarcoma leukosis virus | 第20-21页 |
Murine leukemia virus | 第21-22页 |
Human immunodeficiency virus type-1 | 第22-23页 |
1,5. Inhibition of HIV-1 RT | 第23-24页 |
1,6. Research objectives | 第24-30页 |
CHAPTER 2: COORDINATION OF DNA POLYMERASE AND RIBONUCLEASE H | 第30-64页 |
2,1. Introduction | 第30-31页 |
2,2. Materials and Methods | 第31-42页 |
Enzymes | 第31-32页 |
Plasmids | 第32页 |
Preparation of templates | 第32-34页 |
Oligonucleotides | 第34-37页 |
5'-labeling of RNA and oligonucleotides: | 第37页 |
Reverse transcription and RNase H digestion | 第37-38页 |
RNA sequencing | 第38-39页 |
Gel electrophoresis | 第39-42页 |
2,3. Results | 第42-64页 |
2,3,1. Stability of the 5'-terminal RNA fragment | 第42-46页 |
2,3,2. The variables affected RT, especially RNase H cleavage | 第46-59页 |
2,3,3. The residual RNA fragment remains in association with the DNA product | 第59-64页 |
CHAPTER 3: RNA PRIMING FOR THE SECOND STRAND DNA SYNTHESIS | 第64-81页 |
3,1. Introduction | 第64-69页 |
3,2. Materials and Methods | 第69-71页 |
Template and oligonucleotides | 第69页 |
Reverse transcription | 第69页 |
Restriction enzyme digestion | 第69页 |
Primer extension | 第69-70页 |
Dideoxynucleotide sequencing | 第70页 |
Gel electrophoresis | 第70-71页 |
3,3. Results | 第71-81页 |
3,3,1. Evidence of the second strand DNA synthesis | 第71-77页 |
3,3,2. Initiation of the second strand DNA synthesis | 第77-81页 |
CHAPTER 4: STRUCTURE AND FUNCTION OF HIV-1 RT | 第81-96页 |
4,1. Introduction | 第81-83页 |
4,2. Materials and Methods | 第83-88页 |
Expression of clone for HIV-1 RT | 第83页 |
Constructs of various forms of HIV-1 RT | 第83-84页 |
Templates and oligonucleotides | 第84页 |
Primer extension | 第84-85页 |
Activity gel electrophoresis | 第85-88页 |
4,3. Results | 第88-96页 |
4,3,1. p51 subunits alone is also enable to copy both RNA and DNA templates | 第88-89页 |
4,3,2. Within a heterodimer, p51 could be active while p66 is inactive | 第89-96页 |
CHAPTER 5: Tetrahydroimidazo Benzodiazepin-One and-Thione, A SPECIAL INHIBITOR OF HIV-1 RT | 第96-107页 |
5,1. Introduction | 第96-99页 |
5,2. Materials and Methods | 第99-100页 |
Templates and oligonucleotides | 第99页 |
TIBO derivative | 第99页 |
Actinomycin-D | 第99页 |
Reverse transcription reaction | 第99-100页 |
5,3. Results | 第100-107页 |
5,3,1. TIBO only inhibited the RNA-directed DNA synthesis on wild-type of HIV-1 RT | 第100-103页 |
5,3,2. p51 is sensitive to TIBO on both templates | 第103-107页 |
CHAPTER 6: DISCUSSION | 第107-113页 |
BIBLIOGRAPHY | 第113-122页 |