| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| 1 猪细小病毒的研究进展 | 第8-16页 |
| ·猪细小病毒病的发生与流行特点 | 第8-9页 |
| ·PPV的一般生物学特性 | 第9-10页 |
| ·猪细小病毒分子生物学研究进展 | 第10-12页 |
| ·PPV基因组特点 | 第10页 |
| ·PPV基因组的转录 | 第10-11页 |
| ·PPV基因组产物 | 第11-12页 |
| ·猪细小病毒病疫苗研究进展 | 第12-16页 |
| ·灭活苗 | 第13页 |
| ·弱毒疫苗 | 第13-14页 |
| ·PPV基因工程疫苗 | 第14-16页 |
| 2 病毒样颗粒研究进展 | 第16-21页 |
| ·病毒样颗粒的来源 | 第16-17页 |
| ·病毒样颗粒的应用 | 第17-21页 |
| ·VLPs在基础研究中的应用 | 第17-18页 |
| ·VLPs在载体设计中的应用 | 第18页 |
| ·VLPs在疫苗设计中的应用 | 第18-20页 |
| ·VLPs在免疫测定中的应用 | 第20-21页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 试验研究 | 第22-54页 |
| 1 试验材料 | 第22-25页 |
| ·质粒、菌株及细胞 | 第22页 |
| ·主要药品与试剂 | 第22页 |
| ·引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-24页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| 2 试验方法 | 第25-39页 |
| ·VP2基因的定点突变和突变体的克隆 | 第25-30页 |
| ·质粒pVP2的获得 | 第25-26页 |
| ·质粒pVP2的酶切鉴定 | 第26页 |
| ·VP2基因的定点突变 | 第26-28页 |
| ·pVP2(A)和pVP2(B)的构建 | 第28-30页 |
| ·真核表达载体pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B)的构建 | 第30-32页 |
| ·质粒pPI-2.EGFP与pPVP2(A)、pPVP2(B)的获得 | 第30页 |
| ·质粒pPI-2.EGFP与pPVP2(A)、pPVP2(B)的酶切回收 | 第30-31页 |
| ·回收产物的连接 | 第31页 |
| ·感受态E.coli DH5α细胞的制备 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组质粒转染COS-7细胞 | 第32-35页 |
| ·pPI-2.E6FP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B)质粒DNA的小量抽提与纯化 | 第32-33页 |
| ·细胞的复苏与传代 | 第33-34页 |
| ·重组质粒DNA的转染 | 第34-35页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第35页 |
| ·重组突变体的部分生物学特性研究 | 第35-39页 |
| ·重组质粒的大量抽提及纯化 | 第35-37页 |
| ·试验动物分组 | 第37页 |
| ·免疫后小鼠T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第37页 |
| ·PPV抗体检测 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-46页 |
| ·VP2基因的定点突变和突变体的克隆 | 第39-41页 |
| ·质粒pVP2双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·VP2基因的定点突变 | 第39-40页 |
| ·pVP2(A)和pVP2(B)的构建 | 第40-41页 |
| ·质粒pPI-2.EGFP.VP2(A)、pPI-2.EGFP.VP2(B)的双酶切与PCR鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒转染后的荧光观察 | 第42页 |
| ·超薄切片电镜观察 | 第42-43页 |
| ·重组突变体的部分生物学特性研究 | 第43-46页 |
| ·免疫后小鼠T淋巴细胞数量的动态变化检测 | 第43-44页 |
| ·PPV抗体检测 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-53页 |
| ·半胱氨酸在PPV VLPs结构和功能中的作用 | 第46-47页 |
| ·关于PPV VLPs的构建 | 第47-48页 |
| ·关于重叠延伸PCR定点突变技术 | 第48-49页 |
| ·关于宿主细胞的确定 | 第49-50页 |
| ·关于转染 | 第50-51页 |
| ·重组质粒核酸疫苗的免疫原性 | 第51-53页 |
| ·免疫途径的确定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒的免疫应答 | 第52-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
