| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-29页 |
| ·研究的目的及意义 | 第12页 |
| ·国内外研究进展 | 第12-28页 |
| ·口蹄疫基因工程疫苗研究进展 | 第12-18页 |
| ·逆转录病毒载体系统及其应用研究进展 | 第18-24页 |
| ·病毒样颗粒及其应用的研究进展 | 第24-28页 |
| ·研究方法和内容 | 第28-29页 |
| 第二章 口蹄疫病毒聚蛋白P1缺失突变体对空衣壳形成影响的初步研究 | 第29-41页 |
| ·材料和方法 | 第29-36页 |
| ·载体、质粒、宿主菌、细胞和重组病毒 | 第29页 |
| ·工具酶、试剂盒和其他试剂 | 第29页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·含P1序列不同长度缺失真核表达载体的构建 | 第30-34页 |
| ·表达载体转染BHK-21细胞 | 第34-35页 |
| ·收获表达产物及其检测 | 第35-36页 |
| ·不同含量的3C对P1聚蛋白裂解形成空衣壳的影响 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-39页 |
| ·质粒pGEM—P1-FLAG和pGEM4Z-3C转染细胞后目的蛋白表达 | 第36-37页 |
| ·质粒pGEM—P1-FLAG、pGEM—P1-FLAG—DM1、pGEM—P1-FLAG—DM2、pGEM—P1-FLAG—DM3、pGEM—P1-FLAG—DM4、pGEM4Z-3C转染细胞后目的蛋白表达 | 第37-38页 |
| ·质粒pGEM—P1-FLAG和不同含量pGEM4Z-3C转染细胞后蛋白表达 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 逆转录病毒载体介导的FMDV P1-2A和3C编码序列的转移及稳定表达空衣壳蛋白细胞系的建立 | 第41-64页 |
| ·材料和方法 | 第41-53页 |
| ·病毒、宿主菌、载体、细胞 | 第41页 |
| ·工具酶、T载体、试剂盒和其它试剂 | 第41页 |
| ·引物设计 | 第41-42页 |
| ·病毒RNA提取和反转录 | 第42-43页 |
| ·P1-2A和3C编码序列的扩增及产物回收 | 第43-44页 |
| ·PCR纯化产物与T载体连接、转化和质粒提取 | 第44-46页 |
| ·重组逆转录病毒载体的构建 | 第46-50页 |
| ·重组逆转录假型病毒的包装和感染靶细胞 | 第50-52页 |
| ·稳定表达空衣壳蛋白MDBK细胞的鉴定 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-61页 |
| ·P1-2A和3C编码序列RT—PCR结果 | 第53-54页 |
| ·重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-3C鉴定 | 第54-56页 |
| ·嘌呤霉素对MDBK细胞最小致死浓度和重组病毒滴度的测定结果 | 第56页 |
| ·目的基因整合鉴定 | 第56-57页 |
| ·空衣壳在细胞中表达鉴定 | 第57-58页 |
| ·细胞连续传代后目的基因的整合及空衣壳蛋白的表达 | 第58-60页 |
| ·FMDV空衣壳的电镜观察 | 第60-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第四章 稳定表达空衣壳蛋白MDBK细胞的动物免疫试验 | 第64-72页 |
| ·材料和方法 | 第64-67页 |
| ·病毒、细胞、商品疫苗、实验动物 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·抗原制备及浓缩 | 第64-65页 |
| ·抗原乳化 | 第65页 |
| ·实验动物免疫 | 第65页 |
| ·血清抗体监测 | 第65-66页 |
| ·中和抗体检测 | 第66页 |
| ·攻毒保护试验 | 第66-67页 |
| ·结果 | 第67-70页 |
| ·豚鼠体内FMDV特异性抗体的动态变化 | 第67页 |
| ·FMDV A型AV/88的毒价 | 第67-68页 |
| ·豚鼠血清中的FMDV中和抗体效价 | 第68-69页 |
| ·攻毒保护实验 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 全文结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 作者简历 | 第85页 |
