| 内容提要 | 第1-10页 |
| 第一篇 秀丽线虫蛋白质酪氨酸磷酸酶组的生物信息学研究 | 第10-67页 |
| 第一章 前言 | 第10-28页 |
| 第一节 蛋白质酪氨酸磷酸酶家族的组成 | 第11-16页 |
| 第二节 人类107 个PTPs的分类 | 第16-18页 |
| 第三节 PTPs催化结构域的序列特征 | 第18-21页 |
| 第四节 PTPs的结构特征 | 第21-25页 |
| 第五节 PTPs与人类疾病 | 第25-27页 |
| 第六节 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 一、研究目的 | 第27页 |
| 二、研究意义 | 第27-28页 |
| 第二章 材料与方法 | 第28-34页 |
| 一、从秀丽线虫基因组中搜索蛋白质酪氨酸磷酸酶 | 第28-30页 |
| 二、序列分析及结构域的确定 | 第30-31页 |
| 三、PTP结构域的序列比对及系统发生学分析 | 第31-32页 |
| 四、生物进化树的绘制 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-66页 |
| 第一节 秀丽线虫127 个蛋白质酪氨酸磷酸酶概况 | 第34-44页 |
| 一、秀丽线虫PTP超家族成员 | 第34-38页 |
| 二、秀丽线虫超家族酶活性位点的特征 | 第38-39页 |
| 三、秀丽线虫PTPs在染色体上的定位 | 第39页 |
| 四、秀丽线虫PTPs的表达情况分析 | 第39-41页 |
| 五、秀丽线虫PTPs中的假基因 | 第41-42页 |
| 六、秀丽线虫PTP组中的相似序列 | 第42页 |
| 七、对PTP1B-like cePTPs的活性预测 | 第42-44页 |
| 第二节 秀丽线虫PTPs的分类 | 第44-55页 |
| 一、秀丽线虫PTP1B-like蛋白质酪氨酸磷酸酶 | 第44-52页 |
| 二、秀丽线虫VH1-like双底物特异性磷酸酶 | 第52-54页 |
| 三、CDC25 亚家族 | 第54页 |
| 四、低分子量蛋白质磷酸酶 | 第54页 |
| 五、EYA亚家族酶 | 第54-55页 |
| 第三节 秀丽线虫PTPs的结构特征 | 第55-60页 |
| 一、秀丽线虫PTP1B-like PTPs的结构特征 | 第57-58页 |
| 二、WSN结构域的序列特点 | 第58-60页 |
| 第四节 PTP1B-like PTPs进化规律的初步研究 | 第60-66页 |
| 一、有代表性的真核生物物种PTP组的研究 | 第60-61页 |
| 二、线虫动物门PTP组 | 第61页 |
| 三、脊索动物门PTP组 | 第61页 |
| 四、节肢动物门PTP组 | 第61页 |
| 五、棘皮动物门PTP组 | 第61-62页 |
| 六、原生生物PTP组 | 第62页 |
| 七、多去氧核糖核酸病毒（polydnavirus）中的PTP组 | 第62-66页 |
| 第四章 结论 | 第66-67页 |
| 第二篇 应用RNAi技术研究秀丽线虫MTM3 的生物学功能 | 第67-128页 |
| 第一章 前言 | 第67-85页 |
| 第一节 MTM亚家族蛋白质磷酸酶 | 第67-71页 |
| 第二节 RNA干扰 | 第71-76页 |
| 一、RNAi的机理 | 第71-73页 |
| 二、RNAi的特征 | 第73-74页 |
| 三、RNAi的生物学功能 | 第74-75页 |
| 四、待解决的问题 | 第75-76页 |
| 第三节 秀丽新杆线虫 | 第76-83页 |
| 一、秀丽线虫简介 | 第76-80页 |
| 二、线虫作为模式生物的优势 | 第80-81页 |
| 三、RNAi在线虫中的实现方法 | 第81-83页 |
| 第四节 本研究的目的及意义 | 第83-85页 |
| 一、研究目的 | 第83-84页 |
| 二、研究意义 | 第84-85页 |
| 第二章 秀丽线虫MTM3 的分子克隆 | 第85-98页 |
| 第一节 实验材料 | 第85-86页 |
| 一、菌株及质粒 | 第85页 |
| 二、试剂 | 第85页 |
| 三、仪器 | 第85-86页 |
| 第二节 实验方法 | 第86-91页 |
| 一、基本分子生物学实验方法 | 第86页 |
| 二、cDNA 末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends, RACE) | 第86-87页 |
| 三、引物设计 | 第87页 |
| 四、秀丽线虫总RNA的提取 | 第87页 |
| 五、cDNA的合成 | 第87-88页 |
| 六、目的片段的扩增 | 第88页 |
| 七、RACE产物的序列测定 | 第88-89页 |
| 八、ceMTM3 全长编码区的克隆 | 第89页 |
| 九、融合蛋白表达载体的构建和诱导表达 | 第89-91页 |
| 第三节 实验结果 | 第91-97页 |
| 一、ceMTM3 基因新的亚型的发现 | 第91-95页 |
| 二、ceMTM3b cDNA的克隆 | 第95页 |
| 三、ceMTM3b编码区的全长克隆 | 第95-96页 |
| 四、ceMTM3CT克隆载体的构建 | 第96页 |
| 五、ceMTM3CT表达载体的构建 | 第96-97页 |
| 本章小结 | 第97-98页 |
| 第三章 ceMTM3 多克隆抗体的制备 | 第98-104页 |
| 第一节 实验材料 | 第98-99页 |
| 一、试剂及柱料 | 第98页 |
| 二、缓冲液 | 第98页 |
| 三、仪器设备 | 第98-99页 |
| 第二节 实验方法 | 第99-102页 |
| 一、GST-ceMTM3CT融合蛋白的分离纯化 | 第99页 |
| 二、线虫PRL抗体的制备 | 第99-101页 |
| 三、ceMTM3 抗体的纯化 | 第101-102页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第102-103页 |
| 一、GST-ceMTM3CT融合蛋白的分离纯化 | 第102页 |
| 二、免疫家兔后抗体效价的检测 | 第102-103页 |
| 三、多克隆抗体经纯化后抗体效价的检测 | 第103页 |
| 本章小结 | 第103-104页 |
| 第四章 ceMTM3 生物学功能的研究 | 第104-126页 |
| 第一节 实验材料 | 第104-107页 |
| 一、菌株、线虫和质粒 | 第104页 |
| 二、缓冲液及培养基 | 第104-106页 |
| 三、仪器设备 | 第106-107页 |
| 第二节 实验方法 | 第107-116页 |
| 一、表达ceMTM3 dsRNA菌株的构建 | 第107-108页 |
| 二、线虫的一般培养 | 第108-109页 |
| 三、对线虫ceMTM3 基因的干扰 | 第109-111页 |
| 四、干扰后对线虫表型的观测 | 第111-113页 |
| 五、线虫cPRL基因表达位点的研究 | 第113-114页 |
| 六、磷酸酶活性分析 | 第114-115页 |
| 七、脂质-膜覆盖分析 | 第115页 |
| 八、研究线虫ceMTM3 基因在线虫生命周期的表达 | 第115-116页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第116-124页 |
| 一、dsRNA表达载体的构建 | 第116-117页 |
| 二、ceMTM3 生物化学性质的表征 | 第117-118页 |
| 三、RNAi对ceMTM3 表达的影响 | 第118-121页 |
| 四、干扰后线虫表型变化的观测 | 第121-123页 |
| 五、ceMTM3 表达分布位点的研究 | 第123-124页 |
| 六、ceMTM3 在不同发育阶段线虫中的表达 | 第124页 |
| 本章小结 | 第124-126页 |
| 第五章 结论 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-134页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第134-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
| 中文摘要 | 第136-139页 |
| Abstract | 第139-142页 |
