放射联合基因治疗肿瘤相关性p53突变子实验研究
| 内容提要 | 第1-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 p53基因的结构 | 第10页 |
| 2 p53的功能 | 第10-14页 |
| ·G1、G2期阻滞 | 第10-11页 |
| ·DNA修复 | 第11页 |
| ·细胞死亡 | 第11-14页 |
| 3 p53的靶基因及调控p53的基因 | 第14-16页 |
| ·p53的靶基因 | 第14页 |
| ·调控p53的基因 | 第14-16页 |
| 4 p53基因与肿瘤 | 第16-17页 |
| ·wtp53抗肿瘤的作用机制 | 第16页 |
| ·肿瘤相关性p53基因突变 | 第16页 |
| ·p53基因突变分类 | 第16-17页 |
| 5 肿瘤p53基因治疗 | 第17-19页 |
| ·肿瘤的p53基因治疗 | 第17-18页 |
| ·RNAi技术 | 第18-19页 |
| 6 肿瘤放射联合p53基因治疗 | 第19-20页 |
| 7 本课题研究的意义及前景展望 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-34页 |
| 1 主要试剂及器材 | 第22-24页 |
| ·试剂 | 第22-23页 |
| ·器材 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| 2 细胞株培养 | 第24-25页 |
| ·细胞株 | 第24页 |
| ·细胞培养试剂的配制 | 第24-25页 |
| ·细胞冻存及复苏 | 第25页 |
| 3 表达载体的构建 | 第25-28页 |
| ·试剂配制 | 第25-27页 |
| ·突变子表达载体构建 | 第27-28页 |
| ·shRNA表达载体的构建 | 第28页 |
| 4 突变子细胞模型的建立 | 第28-29页 |
| 5 突变子基因沉默 | 第29页 |
| ·试剂的配制 | 第29页 |
| ·磷酸钙共沉淀法转染 | 第29页 |
| 6 蛋白质免疫印记法(Western Blot) | 第29-33页 |
| ·试剂的配制 | 第29-32页 |
| ·总蛋白提取 | 第32页 |
| ·蛋白浓度测定—标准曲线法 | 第32-33页 |
| ·Western Blot | 第33页 |
| 7 照射条件 | 第33-34页 |
| 第三章 实验结果 | 第34-42页 |
| 1 突变子175H表达载体的构建 | 第34-38页 |
| ·基因定点突变 | 第34-35页 |
| ·载体线性化回收 | 第35页 |
| ·载体连接和扩增 | 第35-36页 |
| ·pcDNA3.1-175H测序结果 | 第36-38页 |
| 2 Psuper-175HR载体构建 | 第38-39页 |
| ·psuper.retro.puro载体的线性化 | 第38页 |
| ·Psuper-175HR载体构建 | 第38-39页 |
| 3 突变子细胞模型和基因沉默检测 | 第39-40页 |
| ·突变子细胞模型构建 | 第39页 |
| ·基因沉默检测 | 第39-40页 |
| 4 突变子细胞模型时程影响 | 第40页 |
| 5 突变子细胞模型量效影响 | 第40-41页 |
| 6 突变子细胞模型基因沉默后时程影响 | 第41-42页 |
| 第四章 讨论 | 第42-46页 |
| 第五章 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第55-56页 |
| 导师简介 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 中文摘要 | 第58-61页 |
| Abstract | 第61-63页 |
