缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-13页 |
ABSTRACT | 第13-17页 |
前言 | 第19-21页 |
文献回顾 | 第21-40页 |
第一部分 海水吸入致MTDNA的产生及其损伤作用 | 第40-65页 |
1 材料 | 第40-41页 |
1.1 主要仪器和设备 | 第40页 |
1.2 药品与试剂 | 第40-41页 |
1.3 实验动物 | 第41页 |
2 方法 | 第41-47页 |
2.1 动物模型的建立 | 第41-42页 |
2.2 大鼠肺组织湿干比(W/D ratio)测定 | 第42页 |
2.3 肺组织固定、切片及HE染色 | 第42页 |
2.4 肺泡灌洗液细胞计数及蛋白含量检测 | 第42-43页 |
2.5 肺泡灌洗液及血液中DNA的提取 | 第43页 |
2.6 线粒体及mtDNA的提取 | 第43-44页 |
2.7 细胞外游离mtDNA的检测 | 第44-45页 |
2.8 细胞的培养与处理 | 第45页 |
2.9 单层细胞通透性检测 | 第45页 |
2.10 中性粒细胞提取与鉴定 | 第45-46页 |
2.11 中性粒细胞黏附功能、渗出及迁移趋化能力检测 | 第46-47页 |
2.12 mtDNA诱导中性粒细胞细胞因子释放分析 | 第47页 |
2.13 实验数据统计分析 | 第47页 |
3 结果 | 第47-62页 |
3.1 在海水吸入型肺损伤的大鼠模型中可以在肺泡灌洗液中检测到mtDNA的存在 | 第47-49页 |
3.2 在海水刺激的HUVC细胞及A549细胞培养上清液中可以检测到mtDNA的存在 | 第49-50页 |
3.3 mtDNA气管内滴注可以诱导急性肺损伤的发生,而抑制mtDNA的产生可以起到改善急性肺损伤的作用 | 第50-52页 |
3.4 mtDNA可以引起HUVEC细胞及A549细胞的损伤及单层细胞通透性的改变 | 第52-55页 |
3.5 mtDNA可以激活中性粒细胞,促进中性粒细胞的黏附、渗出及迁移趋化能力,促进中性粒细胞的细胞因子释放 | 第55-59页 |
3.6 mtDNA的刺激可以诱导SD大鼠肺脏及相关细胞产生大量的ROS | 第59-62页 |
4 讨论 | 第62-65页 |
第二部分 海水吸入致NETS的产生及其损伤作用 | 第65-75页 |
1 材料 | 第65页 |
1.1 主要仪器和设备 | 第65页 |
1.2 药品与试剂 | 第65页 |
2 方法 | 第65-67页 |
2.1 大鼠肺组织切片及肺泡灌洗液中NETs的检测 | 第65-66页 |
2.2 细胞培养上清液中的NETs的检测 | 第66页 |
2.3 NETs的诱导与提取 | 第66-67页 |
2.4 细胞毒性及细胞损伤检测 | 第67页 |
3 结果 | 第67-72页 |
3.1 海水和mtDNA吸入可以引起SD大鼠产生无菌性NETs | 第67-69页 |
3.2 海水刺激共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞可以诱导NETs的产生 | 第69-71页 |
3.3 NETs可以引起HUVEC细胞及A549细胞损伤及单层细胞通透性的改变 | 第71-72页 |
3.4 NETs的产生是依赖于ROS的,给予抗氧化剂后NETs的产生显著减少 | 第72页 |
4 讨论 | 第72-75页 |
第三部分 抑制JNK线粒体转移可以通过减少ROS的产生起到改善肺损伤的作用 | 第75-87页 |
1 材料 | 第75-76页 |
1.1 主要仪器和设备 | 第75页 |
1.2 药品与试剂 | 第75-76页 |
2 方法 | 第76-77页 |
2.1 线粒体及细胞质/细胞核蛋白质的提取 | 第76页 |
2.2 Western blots法检测JNK及相关蛋白分子 | 第76页 |
2.3 组织及细胞氧化应激相关指标的检测 | 第76-77页 |
3 结果 | 第77-84页 |
3.1 急性肺损伤时存在着JNK向线粒体转移的现象 | 第77-80页 |
3.2 应用Tat-SabKIM1多肽可以抑制JNK线粒体转移的现象 | 第80-81页 |
3.3 应用Tat-SabKIM1后可以抑制ROS的产生,起到改善肺损伤的作用 | 第81-84页 |
4 讨论 | 第84-87页 |
小结 | 第87-89页 |
参考文献 | 第89-97页 |
个人简历和研究成果 | 第97-99页 |
致谢 | 第99页 |