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mtDNA及NETs在海水吸入性肺损伤中的作用机制研究

缩略语表第6-8页
中文摘要第8-13页
ABSTRACT第13-17页
前言第19-21页
文献回顾第21-40页
第一部分 海水吸入致MTDNA的产生及其损伤作用第40-65页
    1 材料第40-41页
        1.1 主要仪器和设备第40页
        1.2 药品与试剂第40-41页
        1.3 实验动物第41页
    2 方法第41-47页
        2.1 动物模型的建立第41-42页
        2.2 大鼠肺组织湿干比(W/D ratio)测定第42页
        2.3 肺组织固定、切片及HE染色第42页
        2.4 肺泡灌洗液细胞计数及蛋白含量检测第42-43页
        2.5 肺泡灌洗液及血液中DNA的提取第43页
        2.6 线粒体及mtDNA的提取第43-44页
        2.7 细胞外游离mtDNA的检测第44-45页
        2.8 细胞的培养与处理第45页
        2.9 单层细胞通透性检测第45页
        2.10 中性粒细胞提取与鉴定第45-46页
        2.11 中性粒细胞黏附功能、渗出及迁移趋化能力检测第46-47页
        2.12 mtDNA诱导中性粒细胞细胞因子释放分析第47页
        2.13 实验数据统计分析第47页
    3 结果第47-62页
        3.1 在海水吸入型肺损伤的大鼠模型中可以在肺泡灌洗液中检测到mtDNA的存在第47-49页
        3.2 在海水刺激的HUVC细胞及A549细胞培养上清液中可以检测到mtDNA的存在第49-50页
        3.3 mtDNA气管内滴注可以诱导急性肺损伤的发生,而抑制mtDNA的产生可以起到改善急性肺损伤的作用第50-52页
        3.4 mtDNA可以引起HUVEC细胞及A549细胞的损伤及单层细胞通透性的改变第52-55页
        3.5 mtDNA可以激活中性粒细胞,促进中性粒细胞的黏附、渗出及迁移趋化能力,促进中性粒细胞的细胞因子释放第55-59页
        3.6 mtDNA的刺激可以诱导SD大鼠肺脏及相关细胞产生大量的ROS第59-62页
    4 讨论第62-65页
第二部分 海水吸入致NETS的产生及其损伤作用第65-75页
    1 材料第65页
        1.1 主要仪器和设备第65页
        1.2 药品与试剂第65页
    2 方法第65-67页
        2.1 大鼠肺组织切片及肺泡灌洗液中NETs的检测第65-66页
        2.2 细胞培养上清液中的NETs的检测第66页
        2.3 NETs的诱导与提取第66-67页
        2.4 细胞毒性及细胞损伤检测第67页
    3 结果第67-72页
        3.1 海水和mtDNA吸入可以引起SD大鼠产生无菌性NETs第67-69页
        3.2 海水刺激共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞可以诱导NETs的产生第69-71页
        3.3 NETs可以引起HUVEC细胞及A549细胞损伤及单层细胞通透性的改变第71-72页
        3.4 NETs的产生是依赖于ROS的,给予抗氧化剂后NETs的产生显著减少第72页
    4 讨论第72-75页
第三部分 抑制JNK线粒体转移可以通过减少ROS的产生起到改善肺损伤的作用第75-87页
    1 材料第75-76页
        1.1 主要仪器和设备第75页
        1.2 药品与试剂第75-76页
    2 方法第76-77页
        2.1 线粒体及细胞质/细胞核蛋白质的提取第76页
        2.2 Western blots法检测JNK及相关蛋白分子第76页
        2.3 组织及细胞氧化应激相关指标的检测第76-77页
    3 结果第77-84页
        3.1 急性肺损伤时存在着JNK向线粒体转移的现象第77-80页
        3.2 应用Tat-SabKIM1多肽可以抑制JNK线粒体转移的现象第80-81页
        3.3 应用Tat-SabKIM1后可以抑制ROS的产生,起到改善肺损伤的作用第81-84页
    4 讨论第84-87页
小结第87-89页
参考文献第89-97页
个人简历和研究成果第97-99页
致谢第99页

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