| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 一、引言 | 第11-30页 |
| ·戊型肝炎病毒的研究进展 | 第11-27页 |
| ·HE 病原学 | 第11-12页 |
| ·HEV 基因分型 | 第12-13页 |
| ·HEV 的基因组结构 | 第13-16页 |
| ·ORF1-非结构蛋白编码区 | 第13-14页 |
| ·ORF2-结构蛋白编码区 | 第14-16页 |
| ·ORF3-蛋白编码区 | 第16页 |
| ·HEV 的地理分布 | 第16-17页 |
| ·HEV 作为人畜共患病的传染特性 | 第17-19页 |
| ·HEV 的细胞培养 | 第19-20页 |
| ·HE 的临床特征 | 第20-21页 |
| ·HE 的发病机理 | 第21-22页 |
| ·HEV 的检测方法 | 第22-27页 |
| ·DNA 疫苗简介 | 第27页 |
| ·戊肝DNA 疫苗靶点的选择 | 第27-28页 |
| ·问题与展望 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
| 二、实验材料 | 第30-33页 |
| ·主要仪器设备及材料 | 第30-31页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·菌株、载体和细胞株 | 第30-31页 |
| ·主要实验试剂 | 第31-33页 |
| ·试剂盒 | 第31页 |
| ·酶类 | 第31页 |
| ·抗体 | 第31页 |
| ·抗生素 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31-32页 |
| ·其他 | 第32-33页 |
| 三、实验方法及步骤 | 第33-44页 |
| 第一部分 重组真核表达载体pcDNA3.1（+）/ORF3 的构建、鉴定及其表达 | 第33-42页 |
| ·ORF3 真核表达载体的构建 | 第33-38页 |
| ·引物的设计与合成 | 第33-34页 |
| ·PCR 方法扩增戊型肝炎病毒（HEV）ORF3 部分基因 | 第34页 |
| ·PCR 产物初步鉴定 | 第34页 |
| ·PCR 产物的纯化与回收 | 第34-35页 |
| ·载体PCDNA3.1(+)质粒的准备 | 第35页 |
| ·用限制性内切酶双酶切质粒pcDNA3.1(+)及目的片段ORF3基因 | 第35-36页 |
| ·ORF3 目的片段与载体质粒的连接反应 | 第36-37页 |
| ·感受态细菌DH5-α购自天根公司 | 第37页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 质粒的转化和筛选 | 第37-38页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 真核表达载体的鉴定 | 第38-39页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 的双酶切鉴定 | 第38页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 的PCR 鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序鉴定 | 第39页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 真核表达重组体在Cos-7 细胞中的表达 | 第39-41页 |
| ·无内毒素pcDNA3.1/ORF3 重组质粒的大量制备 | 第39-40页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 重组质粒转染Cos-7 细胞 | 第40-41页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 重组质粒在Cos-7 细胞中的表达鉴定 | 第41-42页 |
| ·免疫细胞化学观察ORF3 基因在Cos-7 细胞中的表达 | 第41页 |
| ·免疫印迹检测转染细胞中表达的ORF3 蛋白 | 第41-42页 |
| 第二部分 pcDNA3.1(+)/ORF3 核酸疫苗在小鼠体内免疫活性的研究 | 第42-44页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 重组质粒核酸疫苗的制备及纯化 | 第42页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 核酸疫苗的免疫接种 | 第42页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 核酸疫苗的免疫活性评价 | 第42-44页 |
| ·体液免疫水平检测 | 第42-43页 |
| ·PCR 法检测ORF3 基因在小鼠肌细胞内的存在 | 第43-44页 |
| 四、实验结果 | 第44-54页 |
| 第一部分ORF3 真核表达载体的构建、鉴定及表达 | 第44-49页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 真核表达载体的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| ·ORF3 基因的PCR 扩增 | 第44页 |
| ·pcDNA3.1(+)空质粒摇菌提纯结果 | 第44-45页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 重组质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·测序鉴定 | 第45-46页 |
| ·pcDNA3.1(+)/ORF3 在Cos-7 细胞中的表达 | 第46-49页 |
| ·免疫荧光细胞化学鉴定 | 第46-47页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第47-49页 |
| 第二部分 pcDNA3.1(+)/ORF3 核酸疫苗在 Balb/C 小鼠中免疫活性的研究结果 | 第49-54页 |
| ·血清特异性抗体的检测 | 第49-52页 |
| ·PCR 检测ORF3 基因在小鼠肌细胞中存在 | 第52-54页 |
| 五、讨论 | 第54-58页 |
| 六、结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66页 |
