| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 第一节 重金属铜对植物的毒害现象 | 第13-16页 |
| 1 重金属铜抑制植物生长和生殖 | 第14页 |
| 2 重金属铜影响植物呼吸作用 | 第14页 |
| 3 重金属铜影响植物光合作用 | 第14-15页 |
| 4 重金属铜影响酶活性 | 第15-16页 |
| 第二节 植物对过量重金属酎性机制 | 第16-19页 |
| 1 排斥机制 | 第16-17页 |
| 1.1 根系分泌物和细胞壁的沉淀螯合作用 | 第16-17页 |
| 1.2 细胞膜的选择调节作用 | 第17页 |
| 2 积累机制 | 第17页 |
| 3 抗氧化机制 | 第17-19页 |
| 第三节 甲疏氣酸亚取还原酶的研宄进展 | 第19-27页 |
| 1 甲硫氣酸亚砜还原酶的分类 | 第19-20页 |
| 1.1 A型甲硫氨酸亚砜还原酶 | 第19-20页 |
| 1.2 B型甲硫氨酸亚砜还原酶 | 第20页 |
| 1.3 fR型甲硫氣酸亚砜还原酶 | 第20页 |
| 2 甲硫氨酸亚砜还原酶基因家族的成员 | 第20-22页 |
| 2.1 基因家族成员及其定位 | 第21页 |
| 2.2 基因家族成员及其定位 | 第21-22页 |
| 3 甲硫氨酸亚砜还原酶的催化机制和电子供体 | 第22-24页 |
| 4 甲硫氨酸亚砜还原酶基因的表达模式及功能 | 第24-25页 |
| 5 铜胁迫下水稻甲硫氨酸亚砜还原酶的研究意义 | 第25-27页 |
| 第二章 OsMSRA4.1和OsMSRB5的克隆及表达 | 第27-41页 |
| 1 材料与方法 | 第27-31页 |
| 1.1 植物材料 | 第27页 |
| 1.2 水稻的培养和处理 | 第27-28页 |
| 1.3 水稻总RNA的提取、反转录合成cDNA | 第28页 |
| 1.4 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的克隆 | 第28-30页 |
| 1.4.1 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的 RT-PCR 扩增 | 第28-29页 |
| 1.4.2 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因目的片段回收 | 第29页 |
| 1.4.3 DH5ct大肠杆菌感受态的制备 | 第29页 |
| 1.4.4 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因连接、热激转化和培养 | 第29页 |
| 1.4.5 筛选单克隆菌落培养、菌液PCR验证 | 第29-30页 |
| 1.4.6 测序并比对、保藏菌株 | 第30页 |
| 1.5 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的qPCR扩增 | 第30-31页 |
| 1.5.1 铜和MV胁迫处理、取样 | 第30页 |
| 1.5.2 qPCR分析OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的表达模式 | 第30-31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.1 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的克隆及序列分析 | 第31-32页 |
| 2.2 OsMSRA4.1和0sMSRB5氨基酸序列比较及进化树分析 | 第32-35页 |
| 2.3 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的表达模式 | 第35-39页 |
| 2.3.1 OsMSRA4.1和OsMSRB5基因的组织表达模式 | 第35-36页 |
| 2.3.2 铜处理对OsMSRA4.1和OsMSRB5基因表达的影响 | 第36-38页 |
| 2.3.3 MV处理对OsMSRA4.1和OsMSRB5基因表达的影响 | 第38-39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 OsMSRA4.1和OsMSRB5的亚细胞定位 | 第41-51页 |
| 1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 1.1 植物材料与表达载体 | 第42页 |
| 1.2 OSMSRA4.1和OsMSRB5亚细胞定位表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 1.2.1 适合亚细胞定位的OsMSRA4.1和OsMSRB5基因克隆 | 第42-43页 |
| 1.2.2 双酶切、目的基因与亚细胞定位空载体连接 | 第43-44页 |
| 1.2.3 目标载体质粒的大量提取 | 第44页 |
| 1.3 基因枪介导目的基因转染洋葱表皮细胞 | 第44-45页 |
| 1.3.1 DNA微弹的制备 | 第44-45页 |
| 1.3.2 基因枪法转染洋葱表皮细胞 | 第45页 |
| 1.4 水稻原生质体的提取及转染 | 第45-46页 |
| 1.4.1 水稻原生质体的提取流程 | 第45-46页 |
| 1.4.2 融合基因载体质粒转染水稻原生质体流程 | 第46页 |
| 1.5 OsMSRA4.1和OsMSRB5的亚细胞定位的观察 | 第46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-49页 |
| 2.1 构建OsMSRA4.1::GFP和OsMSRA4.1::GFP载体 | 第46-47页 |
| 2.2 OsMSRA4.1和OsMSRB5在洋葱表皮细胞的定位 | 第47-48页 |
| 2.3 OsMSRA4.1和OsMSRB5在水稻原生质体的定位 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 OsMSRB5重组蛋白体外酶活力分析 | 第51-59页 |
| 1 材料与方法 | 第52-53页 |
| 1.1 菌株、表达载体 | 第52页 |
| 1.2 OsMSRB5原核表达载体的构建 | 第52页 |
| 1.3 OsMSRB5重组蛋白的表达和纯化 | 第52-53页 |
| 1.3.1 转化大肠杆菌BL21菌株 | 第52页 |
| 1.3.2 IPTG诱导OsMSRB5重组蛋白表达 | 第52-53页 |
| 1.4 OsMSRB5重组蛋白的体外酶活力测试 | 第53页 |
| 1.5 铜离子对OsMSRB5重组蛋白的体外酶活力影响 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-57页 |
| 2.1 pET-30a(+)-OsMSRB5原核表达及重组蛋白纯化 | 第53-54页 |
| 2.2 OsMSRB5重组蛋白的体外酶活力分析 | 第54-56页 |
| 2.3 外源添加铜对OsMSRB5重组蛋白的体外酶活力的影响 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 OsMSRA4.1和OsMSRB5的功能分析 | 第59-75页 |
| 1 材料与方法 | 第59-64页 |
| 1.1 植物材料 | 第59-60页 |
| 1.2 水稻突变体材料的培养 | 第60页 |
| 1.3 水稻OsMSRA4.1和OsMSRB5基因突变体的鉴定 | 第60-63页 |
| 1.3.1 确定T-DNA插入的方式及位点 | 第60页 |
| 1.3.2 鉴定引物的设计 | 第60-61页 |
| 1.3.3 确定鉴定的引物组合 | 第61页 |
| 1.3.4 突变体植株基因组DNA的提取 | 第61-62页 |
| 1.3.5 “三引物”法鉴定突变体 | 第62-63页 |
| 1.4 突变体的繁种 | 第63页 |
| 1.5 OSMSRA4.1基因突变体的基因表达量分析 | 第63页 |
| 1.6 铜和MV胁迫下野生型和突变体水稻的表型测验 | 第63-64页 |
| 1.6.1 铜和MV处理 | 第63页 |
| 1.6.2 铜处理对水稻生长的影响 | 第63-64页 |
| 1.6.3 铜含量测定 | 第64页 |
| 1.6.4 突变体与野生型叶绿素含量测定 | 第64页 |
| 1.6.5 根系细胞质膜完整性的测定 | 第64页 |
| 1.6.6 H2O2组织化学定位 | 第64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 2.1 水稻OsMSRA4.1和OsMSRB5基因突变体的鉴定 | 第64-65页 |
| 2.2 OsMSRA4.1基因突变体的基因表达量分析 | 第65-66页 |
| 2.3 铜和MV胁迫对水稻生长的影响 | 第66-68页 |
| 2.4 铜胁迫下Hwayoung与Oswsra4.1的Cu含量测定 | 第68-69页 |
| 2.5 铜和MV胁迫下野生型和突变体的叶绿素含量测定 | 第69-70页 |
| 2.6 铜和MV处理对水稻根尖质膜完整性的影响 | 第70-71页 |
| 2.7 铜和MV处理对H202积累的影响 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-75页 |
| 第六章 全文总结 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-87页 |
| 附表A 溶液配方 | 第87-95页 |
| 附表B 载体结构图 | 第95-99页 |
| 参加会议情况 | 第99-101页 |
| 致谢 | 第101页 |
