| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 miRNA的概述 | 第13-15页 |
| 1.1.1 miRNA的作用方式 | 第13-14页 |
| 1.1.1.1 动物miRNA作用机制 | 第14页 |
| 1.1.1.2 植物miRNA作用机制 | 第14页 |
| 1.1.2 微藻miRNA的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2 杜氏盐藻 | 第15-17页 |
| 1.2.1 杜氏盐藻简介 | 第15页 |
| 1.2.2 杜氏盐藻积累β-胡萝卜素的机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 杜氏盐藻的产业化 | 第16-17页 |
| 1.2.4 杜氏盐藻的组学研究 | 第17页 |
| 1.3 β-胡萝卜素生物合成 | 第17-19页 |
| 1.3.1 β-胡萝卜素的简介 | 第17-18页 |
| 1.3.2 杜氏盐藻β-胡萝卜素生物合成途径 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的、意义及技术路线 | 第19-21页 |
| 第2章 杜氏盐藻细胞形态及β-胡萝卜素含量变化 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验藻株 | 第21页 |
| 2.1.2 主要化学试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要实验仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 培养基配制 | 第23-24页 |
| 2.2.2 绘制杜氏盐藻生长曲线 | 第24-25页 |
| 2.2.2.1 标准曲线制作 | 第24页 |
| 2.2.2.2 生长曲线制作 | 第24-25页 |
| 2.2.3 盐藻细胞装片制作 | 第25页 |
| 2.2.4 高效液相色谱检测杜氏盐藻β-胡萝卜素含量 | 第25-27页 |
| 2.2.4.1 样品处理 | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 配制标准工作溶液 | 第26页 |
| 2.2.4.3 色谱条件 | 第26页 |
| 2.2.4.4 HPLC检测方法 | 第26-27页 |
| 2.2.4.5 β-胡萝卜素含量计算 | 第27页 |
| 2.2.5透射电子显微镜实验 | 第27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-35页 |
| 2.3.1 杜氏盐藻生长曲线的测定 | 第27-29页 |
| 2.3.2 在高光高盐胁迫条件下盐藻细胞生长情况 | 第29-31页 |
| 2.3.3 杜氏盐藻β-胡萝卜素含量测定 | 第31-33页 |
| 2.3.3.1 β-胡萝卜素标准曲线 | 第31页 |
| 2.3.3.2 定性分析 | 第31-32页 |
| 2.3.3.3 定量分析 | 第32-33页 |
| 2.3.4 透射电子显微镜观察胁迫前后盐藻细胞 | 第33-35页 |
| 2.4 实验讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 本章小节 | 第36-37页 |
| 第3章 杜氏盐藻在高光高盐胁迫下小RNA组学测序 | 第37-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验藻株 | 第37页 |
| 3.1.2 主要化学试剂 | 第37-38页 |
| 3.1.3 主要实验仪器设备 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-42页 |
| 3.2.1 样品处理 | 第38页 |
| 3.2.2 杜氏盐藻CCAP19/18小RNA建库和高通量测序 | 第38页 |
| 3.2.3 杜氏盐藻CCAP19/18小RNA测序数据分析 | 第38-42页 |
| 3.2.3.1 原始数据处理 | 第39-40页 |
| 3.2.3.2 鉴定known miRNAs | 第40页 |
| 3.2.3.3 鉴定novel miRNAs | 第40页 |
| 3.2.3.4 miRNA靶基因预测与靶基因富集分析 | 第40-42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-49页 |
| 3.3.1 杜氏盐藻小RNA测序分析 | 第42-44页 |
| 3.3.2 杜氏盐藻miRNA的鉴定与分离 | 第44-47页 |
| 3.3.2.1 杜氏盐藻known miRNAs和novel miRNAs的鉴定 | 第44页 |
| 3.3.2.2 novel miRNAs二级结构分析 | 第44-45页 |
| 3.3.2.3 杜氏盐藻miRNAs首位碱基偏好性 | 第45-46页 |
| 3.3.2.4 杜氏盐藻MIR基因在基因组上的分别 | 第46-47页 |
| 3.3.3 分析杜氏盐藻差异表达的miRNAs | 第47-48页 |
| 3.3.4 杜氏盐藻差异miRNAs靶基因及其代谢通路预测 | 第48-49页 |
| 3.4 本章讨论 | 第49-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 qRT-PCR验证差异表达miRNAs及其预测靶基因 | 第52-69页 |
| 4.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验藻株 | 第52页 |
| 4.1.2 主要化学试剂 | 第52-53页 |
| 4.1.3 主要实验仪器设备 | 第53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-59页 |
| 4.2.1 样品处理 | 第53页 |
| 4.2.2 杜氏盐藻小RNA提取方法 | 第53-54页 |
| 4.2.3 杜氏盐藻小RNA反转录方法 | 第54-55页 |
| 4.2.4 杜氏盐藻miRNA的qRT-PCR实验 | 第55-59页 |
| 4.2.4.1 杜氏盐藻miRNA稳定内参基因筛选 | 第55-56页 |
| 4.2.4.2 差异miRNAs的qRT-PCR验证 | 第56-58页 |
| 4.2.4.3 差异miRNAs预测靶基因验证 | 第58-59页 |
| 4.2.5 qRT-PCR验证杜氏盐类胡萝卜素代谢途径过程中关键基因表达水平 | 第59页 |
| 4.2.6 Western Blot检测苹果酸脱氢酶的蛋白表达水平 | 第59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-65页 |
| 4.3.1 杜氏盐藻小RNA电泳图 | 第59-60页 |
| 4.3.2 杜氏盐藻小RNA qRT-PCR内参基因筛选 | 第60-62页 |
| 4.3.3 差异miRNAs的qRT-PCR实验结果 | 第62-63页 |
| 4.3.4 差异miRNAs预测靶基因qRT-PCR实验结果 | 第63-64页 |
| 4.3.5 杜氏盐藻类胡萝卜素代谢途径关键基因表达水平 | 第64-65页 |
| 4.3.6 Western Blot检测苹果酸脱氢酶的蛋白表达水平 | 第65页 |
| 4.4 本章讨论 | 第65-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第5章 结论与展望 | 第69-71页 |
| 5.1 实验结论 | 第69-70页 |
| 5.2 创新点 | 第70页 |
| 5.3 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-77页 |
| 附录 | 第77-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第85页 |
