| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| Chapter 1 Introduction | 第13-29页 |
| 1.1 Nanoparticles in drug delivery | 第13-15页 |
| 1.2 Virus protein capsid | 第15-16页 |
| 1.3 Non-Viral protein capsid | 第16-18页 |
| 1.4 Aa LS protein capsid | 第18-20页 |
| 1.5 Aa LS-IC | 第20-21页 |
| 1.6 Selenocystine | 第21-23页 |
| 1.7 Cell internalization and targeting peptide | 第23-25页 |
| 1.8 Aim of this thesis | 第25-29页 |
| Chapter 2 Materials and Methods | 第29-67页 |
| 2.1 Cells and plasmids | 第29页 |
| 2.2 Reagents | 第29-31页 |
| 2.3 Instruments | 第31-32页 |
| 2.4 Protein production and purification | 第32-40页 |
| 2.4.1 Materials | 第32-33页 |
| 2.4.2 Solution preparation | 第33-35页 |
| 2.4.3 Methods | 第35-40页 |
| 2.5 Loading selenocystine into Aa LS-IC protein capsid | 第40-42页 |
| 2.5.1 Materials | 第40页 |
| 2.5.2 Solution preparation | 第40页 |
| 2.5.3 Methods | 第40-42页 |
| 2.6 Determination the reaction yield for Aa LS-IC and selenocystine reaction | 第42-45页 |
| 2.6.1 Materials | 第42-43页 |
| 2.6.2 Solution preparation | 第43页 |
| 2.6.3 Methods | 第43-45页 |
| 2.7 Structural comparison of Aa LS variants and Sec conjugate | 第45-48页 |
| 2.7.1 Materials | 第45页 |
| 2.7.2 Solution preparation | 第45-46页 |
| 2.7.3 Methods | 第46-48页 |
| 2.8 Release of selenocysteine | 第48-53页 |
| 2.8.1 Materials | 第48页 |
| 2.8.2 Solution preparation | 第48-49页 |
| 2.8.3 Methods | 第49-53页 |
| 2.9 Cytotoxicity study | 第53-57页 |
| 2.9.1 Materials | 第53-54页 |
| 2.9.2 Solution preparation | 第54页 |
| 2.9.3 Methods | 第54-57页 |
| 2.10 Cell uptake study | 第57-58页 |
| 2.10.1 Materials | 第57页 |
| 2.10.2 Solution preparation | 第57页 |
| 2.10.3 Methods | 第57-58页 |
| 2.11 Synthesis of N-hydroxysuccinimide ester of 7-amino4methyl-coumarin3acetic acid (NHS-AMCA) | 第58-59页 |
| 2.11.1 Materials | 第58页 |
| 2.11.2 Methods | 第58-59页 |
| 2.12 Synthesis of the conjugate between selenocystine and N-hydroxysuccinimideester of 7-amino4methyl-coumarin3acetic acid (NHS-AMCA) | 第59-67页 |
| 2.12.1 Materials | 第59页 |
| 2.12.2 Methods | 第59-67页 |
| Chapter 3 Results | 第67-101页 |
| 3.1 Loading of selenocystine | 第67-72页 |
| 3.1.1 Determination of loading yield | 第67-71页 |
| 3.1.2 Characterization of Aa LS-IC-Sec | 第71-72页 |
| 3.2 Characterization of Aa LS variants | 第72-76页 |
| 3.2.1 Structural analysis of Aa LS-EC and Aa LS-EC-Sec | 第73页 |
| 3.2.2 Structural analysis of Aa LS-IC-pent and Aa LS-IC-pent-Sec | 第73-76页 |
| 3.3 Release of encapsulated Sec | 第76-80页 |
| 3.3.1 GSH release of encapsulated Sec | 第76页 |
| 3.3.2 DTT release of encapsulated Sec | 第76页 |
| 3.3.3 Negative control for releasing study | 第76页 |
| 3.3.4 Compare release yield with loading yield | 第76-80页 |
| 3.4 Cytotoxicity | 第80-83页 |
| 3.5 Cell uptake | 第83-84页 |
| 3.6 Synthesis of N-hydroxysuccinimide ester of 7-amino4methyl-coumarin3acetic acid (NHS-AMCA) | 第84-85页 |
| 3.7 Synthesis of the conjugate between selenocystine and N-hydroxysuccinimideester of 7-amino4methyl-coumarin3acetic acid (NHS-AMCA) | 第85-101页 |
| 3.7.1 Reaction attempt with wrong selenocystine | 第85-87页 |
| 3.7.2 Characterization of selenocystine | 第87-89页 |
| 3.7.3 Reaction attempt for two dye attaching right selenocystine | 第89-92页 |
| 3.7.4 Control reaction with glycine and cysteine | 第92-96页 |
| 3.7.5 Reaction attempt for one dye attached selenocystine | 第96-97页 |
| 3.7.6 Purification for one dye attached selenocystine | 第97-101页 |
| Chapter 4 Discussion | 第101-111页 |
| 4.1 Encapsulation and release of Sec | 第101页 |
| 4.2 Role of capsid architecture and cysteine location | 第101-102页 |
| 4.3 Correlation between cytotoxicity and cell penetration and location | 第102-103页 |
| 4.4 Synthesis of the conjugate between selenocystine and N-hydroxysuccinimideester of 7-amino4methyl-coumarin3acetic acid (NHS-AMCA) | 第103-104页 |
| 4.5 Conclusion & Outlook | 第104-111页 |
| References | 第111-121页 |
| Appendix | 第121-133页 |
| Acknowledgements | 第133页 |
