| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第10-15页 |
| 1.1 茶氨酸及其代谢相关酶的研究 | 第10-12页 |
| 1.1.1 茶氨酸的理化性质 | 第10页 |
| 1.1.2 茶氨酸的生理功能 | 第10页 |
| 1.1.3 茶氨酸在茶树体内的分布规律 | 第10-11页 |
| 1.1.4 茶树体内茶氨酸的代谢 | 第11-12页 |
| 1.2 谷氨酰胺合成酶研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2.1 植物谷氨酰胺合成酶的种类与分布 | 第13页 |
| 1.2.2 植物谷氨酰胺合成酶的分子生物学研究 | 第13页 |
| 1.2.3 植物谷氨酰胺合成酶的表达与调控 | 第13页 |
| 1.3 谷胺酰转肽酶研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 大肠杆菌、酿酒酵母、毛状根表达系统的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统 | 第14页 |
| 1.4.2 酿酒酵母表达系统 | 第14-15页 |
| 1.4.3 毛状根表达系统 | 第15页 |
| 2 引言 | 第15-16页 |
| 2.1 研究目的及意义 | 第15页 |
| 2.2 研究内容 | 第15-16页 |
| 3 材料与方法 | 第16-29页 |
| 3.1 材料、试剂与仪器 | 第16-17页 |
| 3.1.1 材料 | 第16页 |
| 3.1.2 试剂 | 第16-17页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第17页 |
| 3.2 实验方法 | 第17-29页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第17-18页 |
| 3.2.2 总RNA的提取 | 第18页 |
| 3.2.3 cDNA第一链的合成 | 第18页 |
| 3.2.4 CsGS1-1 基因的扩增、原核表达载体构建以及在大肠杆菌中的表达与酶活检测 | 第18-21页 |
| 3.2.5 CsGS1-2 基因的扩增、酵母表达载体构建以及在酿酒酵母中的表达与酶活检测 | 第21-23页 |
| 3.2.6 CsGS1-2 基因的扩增、原核表达载体构建以及在大肠杆菌中的表达 | 第23-25页 |
| 3.2.7 CsGS1-1 基因在大豆毛状根中表达载体的构建 | 第25-27页 |
| 3.2.8 CsGGT基因的克隆及原核表达载体构建 | 第27-29页 |
| 4 结果与分析 | 第29-39页 |
| 4.1 茶树幼根RNA完整性及纯度检测 | 第29-30页 |
| 4.2 CsGS1-1 基因的扩增产物、原核表达载体构建以及在大肠杆菌中的表达与酶活检测情况 | 第30-33页 |
| 4.2.1 CsGS1-1 完整阅读框扩增产物的电泳检测 | 第30页 |
| 4.2.2 pMAL-CsGS1-1 重组载体的验证 | 第30-31页 |
| 4.2.3 pMAL-CsGS1-1 在大肠杆菌中表达 | 第31页 |
| 4.2.4 pMAL-CsGS1-1 在大肠杆菌中体内酶活检测 | 第31-33页 |
| 4.3 CsGS1-2 基因的扩增产物、酵母表达载体构建以及在酿酒酵母中的表达与酶活检测情况 | 第33-34页 |
| 4.3.1 CsGS1-2 完整阅读框扩增产物的电泳检测 | 第33页 |
| 4.3.2 pYesdest52-CsGS1-2 重组载体的验证 | 第33-34页 |
| 4.3.3 pYesdest52-CsGS1-2 重组载体在酿酒酵母中的诱导表达及酶活检测 | 第34页 |
| 4.4 CsGS1-2 基因的扩增产物、原核表达载体构建以及在大肠杆菌中的表达情况 | 第34-36页 |
| 4.4.1 CsGS1-2 完整阅读框扩增产物的电泳检测 | 第34-35页 |
| 4.4.2 pMAL-CsGS1-2 重组载体的验证 | 第35页 |
| 4.4.3 pMAL-CsGS1-2 在大肠杆菌中表达蛋白的可溶性分析。 | 第35-36页 |
| 4.5 CsGS1-1 基因在大豆毛状根中表达载体的构建的验证 | 第36-37页 |
| 4.5.1 CsGS1-1 ORF扩增产物的电泳检测 | 第36页 |
| 4.5.2 pB2GW7-CsGS1-1 重组载体的验证 | 第36-37页 |
| 4.6 CsGGT基因在大肠杆菌中重组表达载体的验证 | 第37-39页 |
| 4.6.1 CsGTT完整阅读框扩增产物的电泳检测 | 第37-38页 |
| 4.6.2 pGEX-CsGTT重组载体的验证 | 第38-39页 |
| 5 讨论 | 第39-41页 |
| 5.1 CsGS1-1 在大肠杆菌中的酶活检测 | 第39页 |
| 5.2 CsGS1-2 在酿酒酵母中的表达与酶活检测 | 第39页 |
| 5.3 GGT与茶氨酸合成 | 第39-41页 |
| 6. 结论 | 第41-42页 |
| 6.1 CsGS1-1 在大肠杆菌中的表达及酶活检测 | 第41页 |
| 6.2 CsGS1-2 在酿酒酵母中的表达及酶活检测与在大肠杆菌中的表达 | 第41页 |
| 6.2.1 CsGS1-2 在酿酒酵母中的表达及酶活检测 | 第41页 |
| 6.2.2 CsGS1-2 在大肠杆菌中的表达 | 第41页 |
| 6.3 CsGS1-1 在大豆毛状根中的表达载体的构建与CsGTT原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 6.3.1 CsGS1-1 在大豆毛状根中表达载体的构建 | 第41页 |
| 6.3.2 CsGGT在原核表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 附表 A. 英文缩写及注释 | 第46-47页 |
| 附录 B. Cs GS1-1、Cs GS1-2 与 Cs GGT 基因 ORF 核苷酸序列 | 第47-49页 |
| 附录 C. 茶氨酸与谷氨酰胺标准曲线（UPLC-MS-MS） | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 作者简介 | 第51页 |
| 硕士在读期间发表的学术论文 | 第51页 |
