| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩写符号 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 乳中寡糖的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1 关于游离寡糖简介 | 第13-14页 |
| 1.2 关于糖蛋白寡糖简介 | 第14-18页 |
| 1.2.1 糖蛋白简介 | 第14-15页 |
| 1.2.2 糖蛋白获取方法 | 第15-16页 |
| 1.2.3 糖蛋白寡糖种类 | 第16-18页 |
| 2 寡糖的结构分析 | 第18-23页 |
| 2.1 N-链寡糖的解离 | 第18-20页 |
| 2.1.1 酶法释放法 | 第18-19页 |
| 2.1.2 化学释放法 | 第19-20页 |
| 2.2 糖链的衍生标记 | 第20页 |
| 2.3 糖链的检测及结构解析 | 第20-23页 |
| 2.3.1 高效液相色谱法 | 第21页 |
| 2.3.2 核磁共振(NMR) | 第21-22页 |
| 2.3.3 毛细管电泳技术(CE) | 第22页 |
| 2.3.4 质谱(MS) | 第22-23页 |
| 3 猪乳N-链寡糖的生物学功能及研究现状 | 第23-24页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 乳中糖蛋白获取以及不同方法酶切效率的比较 | 第25-37页 |
| 1 仪器及材料 | 第25-26页 |
| 1.1 乳样 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 仪器 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.1 技术路线 | 第26-27页 |
| 2.2 牛乳中糖蛋白的沉淀方法的比较 | 第27-28页 |
| 2.2.1 TCA沉淀法 | 第27页 |
| 2.2.2 有机溶剂法 | 第27页 |
| 2.2.3 透析法 | 第27-28页 |
| 2.2.4 盐析法 | 第28页 |
| 2.3 对不同获得糖蛋白方法酶切效率的比较 | 第28-31页 |
| 2.3.1 PNGase F的表达 | 第28页 |
| 2.3.2 PNGase F的纯化 | 第28-29页 |
| 2.3.3 PNGase F解离糖蛋白 | 第29页 |
| 2.3.4 Supelclean~(TM) ENVI-Carb~(TM)预装柱纯化除杂 | 第29-30页 |
| 2.3.5 2-AB的荧光衍生 | 第30页 |
| 2.3.6 高效液相色谱法(HPLC) | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-35页 |
| 3.1 乳中糖蛋白粗提方法的比较 | 第31-32页 |
| 3.2 不同沉淀方法获得的蛋白酶切后N-链寡糖的比较 | 第32-35页 |
| 3.2.1 N-链寡糖UHPLC峰谱的比较 | 第32-33页 |
| 3.2.2 所得到的N-链寡糖的量的比较 | 第33-35页 |
| 5 小结 | 第35-37页 |
| 第三章 猪乳中N-链寡糖的结构测定 | 第37-55页 |
| 1 仪器及材料 | 第37-38页 |
| 1.1 乳样 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.3 外切糖苷酶 | 第37-38页 |
| 1.4 仪器 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-43页 |
| 2.1 HPLC检测猪乳中N-链寡糖含量以及预测N-糖结构 | 第38-41页 |
| 2.1.1 猪乳糖蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 2.1.2 内切糖苷酶反应 | 第39页 |
| 2.1.3 Supelclean~(TM) ENVI-Carb~(TM)预装柱纯化 | 第39页 |
| 2.1.4 2-AB荧光衍生 | 第39-40页 |
| 2.1.5 高效液相色谱法(HPLC) | 第40页 |
| 2.1.6 猪乳N-链寡糖的外切糖苷酶处理 | 第40-41页 |
| 2.2 MALDI-TOF质谱检测 | 第41-43页 |
| 2.2.1 MALDI-TOF相关试剂的配制 | 第41页 |
| 2.2.2 超甲基化处理 | 第41-42页 |
| 2.2.3 MALDI-TOF检测操作流程 | 第42-43页 |
| 3 结果与讨论 | 第43-53页 |
| 3.1 猪乳N-糖基化寡糖结构分析 | 第43-50页 |
| 3.2 相同品种不同泌乳期、不同品种同一泌乳期N-链寡糖含量比较 | 第50-52页 |
| 3.3 猪乳N-糖基化寡糖中几种主要糖型含量的比较 | 第52-53页 |
| 4 小结 | 第53-55页 |
| 全文结论 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附图 | 第63-79页 |
| 论文创新点 | 第79-81页 |
| 攻读硕士学位发表论文情况 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
