| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 木薯的概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 木薯的的生物学特点 | 第12页 |
| 1.1.2 木薯的用途和应用价值 | 第12-13页 |
| 1.1.3 木薯的光合特性及同化物的积累特点 | 第13页 |
| 1.2 植物转化酶研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 植物转化酶的简介 | 第13-14页 |
| 1.2.2 植物转化酶的分类及酶学特性 | 第14页 |
| 1.2.3 植物转化酶的生理功能 | 第14-17页 |
| 1.2.4 木薯中转化酶的研究背景 | 第17页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 1.4 研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第19页 |
| 2.1.3 酶、生化试剂和试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.4 培养基及添加成分 | 第19-20页 |
| 2.2 MeNINV1基因启动子的克隆 | 第20-23页 |
| 2.2.1 木薯基因组DNA提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第21页 |
| 2.2.3 PCR体系及反应条件 | 第21页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第21页 |
| 2.2.5 PCR产物与T载体连接 | 第21-22页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态的制备 | 第22页 |
| 2.2.7 连接产物转化大肠杆菌感受态 | 第22页 |
| 2.2.8 阳性克隆的筛选及测序 | 第22页 |
| 2.2.9 重组质粒DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.3 MeNINV1基因启动子的生物信息学分析 | 第23页 |
| 2.4 MeNINV1基因的表达模式分析 | 第23-25页 |
| 2.4.1 木薯总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.4.2 反转录 | 第24页 |
| 2.4.3 MeNINV1基因实时荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.5 MeNINV1蛋白在酵母中的功能验证 | 第25-28页 |
| 2.5.1 酵母表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.5.2 重组质粒的检测 | 第26页 |
| 2.5.3 重组质粒转化酵母转化酶突变体 | 第26页 |
| 2.5.4 酵母菌落PCR | 第26-27页 |
| 2.5.5 酵母功能互补试验 | 第27-28页 |
| 2.6 MeNINV1的酶学特性分析 | 第28-29页 |
| 2.6.1 转基因酵母转化酶活性的测定方法 | 第28页 |
| 2.6.2 最适pH测定 | 第28页 |
| 2.6.3 最适温度测定 | 第28-29页 |
| 2.6.4 不同底物蔗糖浓度下酶活性测定 | 第29页 |
| 2.6.5 底物特异性测定 | 第29页 |
| 2.6.6 不同果糖浓度下,MeNINV1酶活性测定 | 第29页 |
| 2.6.7 不同Tris浓度下,MeNINV1酶活性测定 | 第29页 |
| 2.7 MeNINV1蛋白在木薯中的细胞定位及过量表达 | 第29-35页 |
| 2.7.1 植物表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.7.2 农杆菌感受态细胞制备 | 第30页 |
| 2.7.3 重组质粒转化农杆菌 | 第30-31页 |
| 2.7.4 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第31页 |
| 2.7.5 农杆菌介导转化木薯愈伤组织 | 第31-32页 |
| 2.7.6 转基因木薯的分子检测 | 第32页 |
| 2.7.7 转基因木薯的Southern Blotting | 第32-33页 |
| 2.7.8 MeNINV1蛋白的亚细胞定位观察 | 第33-34页 |
| 2.7.9 转基因木薯植株MeNINV1基因表达分析 | 第34页 |
| 2.7.10 转基因木薯植株碱性/中性转化酶酶活测定 | 第34页 |
| 2.7.11 转基因木薯植株还原糖和葡萄糖含量测定 | 第34-35页 |
| 3 实验结果及分析 | 第35-59页 |
| 3.1 MeNINV1启动子的克隆及生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 3.1.1 木薯基因组DNA提取 | 第35页 |
| 3.1.2 MeNINVI启动子的克隆及生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 3.2 MeNINV1基因的表达分析 | 第38-40页 |
| 3.2.1 RNA的提取及cDNA的检测 | 第38-39页 |
| 3.2.2 不同激素处理条件下MeNINV1基因的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.3 MeNINV1蛋白在酵母中的功能验证 | 第40-43页 |
| 3.3.1 酵母表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 转基因酵母阳性检测 | 第41-42页 |
| 3.3.3 转基因酵母功能互补验证 | 第42-43页 |
| 3.4 重组MeNINV1的酶学特性分析 | 第43-49页 |
| 3.4.1 不同pH条件下MeNINV1粗酶液的活性研究 | 第43-44页 |
| 3.4.2 不同温度条件下MeNINV1粗酶液的活性研究 | 第44-45页 |
| 3.4.3 不同蔗糖底物浓度条件下MeNINV1粗酶液的活性研究 | 第45-46页 |
| 3.4.4 不同果糖浓度对MeNINV1粗酶液的活性的抑制 | 第46页 |
| 3.4.5 MeNINV1催化底物特异性的研究 | 第46-47页 |
| 3.4.6 不同Tris浓度对MeNINV1粗酶液的活性的抑制 | 第47页 |
| 3.4.7 不同金属离子对MeNINV1粗酶液的活性的抑制 | 第47-48页 |
| 3.4.8 不同化学试剂对MeNINV1粗酶液的活性的抑制 | 第48-49页 |
| 3.5 MeNINV1蛋白在木薯中的细胞定位及过量表达 | 第49-59页 |
| 3.5.1 植物表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.5.2 重组质粒转化农杆菌 | 第50-51页 |
| 3.5.3 农杆菌介导转化木薯愈伤组织 | 第51页 |
| 3.5.4 转基因木薯的分子检测 | 第51-54页 |
| 3.5.5 MeNINV1的亚细胞定位分析 | 第54-55页 |
| 3.5.6 转基因木薯植株MeNINV1基因表达分析 | 第55-57页 |
| 3.5.7 转基因木薯碱性/中性转化酶酶活性分析 | 第57页 |
| 3.5.8 转基因木薯还原糖和葡萄糖含量分析 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-63页 |
| 4.1 MeNINV1基因启动子生物信息学分析及激素对其表达的影响 | 第59-60页 |
| 4.2 MeNINV1在酵母中的功能验证及酶学特性分析 | 第60-61页 |
| 4.3 MeNINV1的亚细胞定位及在木薯中的功能分析 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录 | 第71-72页 |
| 个人简介 | 第72页 |
| 教育经历 | 第72页 |
| 硕士在读期间撰写及发表的论文 | 第72页 |
| 研究项目支持 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
