| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 核桃遗传转化体系的研究 | 第10-12页 |
| 1.1.1 植物遗传转化概述 | 第10页 |
| 1.1.2 影响农杆菌介导的因素 | 第10-11页 |
| 1.1.2.1 菌液浓度及侵染时间 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 共培养时间 | 第11页 |
| 1.1.2.3 抗生素 | 第11页 |
| 1.1.3 核桃体细胞胚的发生 | 第11-12页 |
| 1.1.4 核桃遗传转化体系的研究进展 | 第12页 |
| 1.2 RNA干扰载体在植物遗传转化中的应用 | 第12-13页 |
| 1.3 GA20OX基因的研究及应用 | 第13-14页 |
| 1.3.1 赤霉素的概述 | 第13页 |
| 1.3.2 GA20-氧化酶的研究 | 第13-14页 |
| 1.3.3 GA20ox基因过表达 | 第14页 |
| 1.3.4 GA20oxRNAi | 第14页 |
| 1.4 植物微嫁接概述及砧穗间信息交流研究进展 | 第14-19页 |
| 1.4.1 植物微嫁接常用方法 | 第14-15页 |
| 1.4.2 砧木接穗间愈合过程探究 | 第15页 |
| 1.4.3 影响微嫁接植株生长的相关因素 | 第15-16页 |
| 1.4.3.1 砧木和接穗本身的生长状况 | 第15-16页 |
| 1.4.3.2 外源添加物 | 第16页 |
| 1.4.3.3 嫁接速度 | 第16页 |
| 1.4.4 微嫁接技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.4.4.1 果树脱毒 | 第16-17页 |
| 1.4.4.2 植物病毒的快速检测 | 第17页 |
| 1.4.4.3 无病毒苗木的快速繁育 | 第17页 |
| 1.4.5 微嫁接植物的相关研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.5.1 生理指标 | 第17-18页 |
| 1.4.5.2 物质运输 | 第18页 |
| 1.4.5.3 信号传递 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究的背景、目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 核桃GA20oxRNAi载体遗传转化体系的构建 | 第20-34页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 载体及菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.5 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.6 抗生素及主要溶液的配制 | 第21页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-28页 |
| 2.2.1 核桃体胚的增殖 | 第21-22页 |
| 2.2.2 核桃体胚的预培养 | 第22页 |
| 2.2.3 农杆菌的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.3.1 菌株活化 | 第22页 |
| 2.2.3.2 pTCK303-GA20ox-R载体PCR检测 | 第22-23页 |
| 2.2.3.3 侵染液的制备 | 第23页 |
| 2.2.4 共培养 | 第23页 |
| 2.2.5 筛选培养 | 第23-24页 |
| 2.2.6 核桃体胚GUS检测 | 第24页 |
| 2.2.6.1 GUS染液的配制 | 第24页 |
| 2.2.6.2 GUS检测 | 第24页 |
| 2.2.7 核桃体胚荧光定量PCR检测 | 第24-27页 |
| 2.2.7.1 总RNA的提取 | 第24-26页 |
| 2.2.7.2 第一链cDNA的合成 | 第26页 |
| 2.2.7.3 实时荧光定量PCR基因表达分析 | 第26-27页 |
| 2.2.8 阳性体胚诱导成苗 | 第27-28页 |
| 2.2.8.1 体胚脱水 | 第27页 |
| 2.2.8.2 萌发 | 第27页 |
| 2.2.8.3 成苗 | 第27-28页 |
| 2.2.9 GA20ox基因的实时荧光定量分析 | 第28页 |
| 2.2.9.1 总RNA的提取 | 第28页 |
| 2.2.9.2 cDNA的合成 | 第28页 |
| 2.2.9.3 GA20ox基因的实时荧光定量 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 核桃体胚的增殖 | 第28页 |
| 2.3.2 农杆菌单菌落菌检结果 | 第28-29页 |
| 2.3.3 不同菌液浓度及侵染时间对转化的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.4 体胚总RNA的提取 | 第30-31页 |
| 2.3.5 阳性体胚诱导成苗 | 第31页 |
| 2.3.6 核桃苗总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.7 定量PCR检测 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 3 核桃微嫁接砧穗间转基因信号交流的探究 | 第34-46页 |
| 3.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.3 主要试剂及配方 | 第34页 |
| 3.1.4 引物序列 | 第34-35页 |
| 3.2 方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 植物材料的繁殖培养 | 第35页 |
| 3.2.2 转基因幼苗中DsRED基因在体外培养中的表达 | 第35页 |
| 3.2.3 微嫁接 | 第35-36页 |
| 3.2.4 荧光显微镜检测 | 第36页 |
| 3.2.5 嫁接单元的切片观察 | 第36-37页 |
| 3.2.6 接穗中DsRED基因的检测 | 第37-40页 |
| 3.2.6.1 CTAB法提取DNA | 第37页 |
| 3.2.6.2 PCR检测 | 第37-38页 |
| 3.2.6.3 总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.6.4 cDNA的合成 | 第38-39页 |
| 3.2.6.5 实时荧光定量PCR分析基因表达 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-43页 |
| 3.3.1 嫁接苗培养 | 第40页 |
| 3.3.2 体外培养基因表达的稳定性检测 | 第40-42页 |
| 3.3.3 转基因砧木对嫁接的影响 | 第42页 |
| 3.3.4 DsRED基因未进行砧木接穗间的运输 | 第42-43页 |
| 3.3.5 接穗中DsRED mRNA的检测结果 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 4 结论与展望 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 附图 | 第56-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 缩略词表 | 第62页 |
| DKW培养基 | 第62-63页 |
| 个人简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
