| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 高等植物的分枝发育 | 第13-15页 |
| 1.1.1 顶端优势现象 | 第13-14页 |
| 1.1.2 侧芽发生与生长 | 第14-15页 |
| 1.2 烟草生产中的打顶与抹芽 | 第15-16页 |
| 1.3 植物茎顶端分生组织的维持与分化 | 第16-18页 |
| 1.4 植物侧分生组织起始的相关基因及其调控机制 | 第18-23页 |
| 1.4.1 GRAS转录因子家族的LS/LAS/MOC1基因 | 第18-20页 |
| 1.4.2 R2R3-MYB转录因子家族的RAXs/BLIND基因 | 第20页 |
| 1.4.3 HD-Zip Ⅲ转录因子亚家族的rev基因 | 第20-22页 |
| 1.4.4 bHLH转录因子家族的lax和spa | 第22-23页 |
| 1.4.5 其他调控侧分生组织形成的基因 | 第23页 |
| 1.5 CRISPR/CAS9基因编辑技术在植物中的运用 | 第23-25页 |
| 第二章 引言 | 第25-27页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第25页 |
| 2.2 研究内容 | 第25-26页 |
| 2.3 技术路线 | 第26-27页 |
| 第三章 烟草侧分生组织形成相关基因CDS序列的克隆及组织表达分析 | 第27-47页 |
| 3.1 材料与方法 | 第27-29页 |
| 3.1.1 材料 | 第27页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第27页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第27-28页 |
| 3.1.4 主要试剂溶液配方 | 第28-29页 |
| 3.2 实验方法及步骤 | 第29-35页 |
| 3.2.1 烟草野生型红花大金元的组织培养 | 第29页 |
| 3.2.2 烟草HD-ZipⅢ转录因子家族的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.3 las,bl基因序列的获得 | 第30页 |
| 3.2.4 序列分析 | 第30页 |
| 3.2.5 Ntlas1/Ntlas2, Ntrax1/Ntrax2, NtHB6/NtHB9 CDS序列的克隆 | 第30-33页 |
| 3.2.6 烟草组织表达分析 | 第33-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-45页 |
| 3.3.1 烟草HD-Zip Ⅲ转录因子家族的鉴定 | 第35-39页 |
| 3.3.2 烟草Ntlas1/Ntlas2和Ntrax1/Ntrax2的序列分析 | 第39-43页 |
| 3.3.3 烟草腋芽总RNA提取 | 第43页 |
| 3.3.4 Ntlas1/Ntlas2,Ntrax1/Ntrax2,NtHB6/NtHB9 CDS序列的克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.5 Ntlas1/Ntlas2,Ntrax1/Ntrax2,NtHB1～9烟草组织表达谱分析 | 第44-45页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 烟草侧分生组织形成相关基因(LAS,BL,REV)敲除突变体的获得 | 第47-59页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 植物材料及载体菌株 | 第47页 |
| 4.1.2 实验仪器设备 | 第47页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第47页 |
| 4.1.4 溶液及培养基配制 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法及步骤 | 第48-53页 |
| 4.2.1 基因敲除靶位点设计 | 第48页 |
| 4.2.2 单基因敲除载体的构建 | 第48-50页 |
| 4.2.3 双基因敲除载体的构建 | 第50-51页 |
| 4.2.4 农杆菌感受态制备及敲除载体转化农杆菌 | 第51页 |
| 4.2.5 农杆菌介导的遗传转化侵染烟草叶片 | 第51-52页 |
| 4.2.6 突变植株的筛选 | 第52-53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-58页 |
| 4.3.1 敲除靶位点设计与载体构建 | 第53-55页 |
| 4.3.2 农杆菌阳性转化子筛选 | 第55页 |
| 4.3.3 再生植株的获得 | 第55-56页 |
| 4.3.4 植株的突变筛选 | 第56-57页 |
| 4.3.5 突变株的统计 | 第57-58页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第58-59页 |
| 第五章 Rev2-6突变表型的多效性分析及基因功能研究 | 第59-75页 |
| 5.1 实验材料 | 第59页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第59页 |
| 5.1.2 实验仪器设备 | 第59页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第59页 |
| 5.2 实验方法及步骤 | 第59-64页 |
| 5.2.1 Rev2-6突变检测 | 第59页 |
| 5.2.2 Rev2-6突变表型的观察 | 第59页 |
| 5.2.3 烟草叶片横切面显微结构观察 | 第59-60页 |
| 5.2.4 烟草叶片单位叶面积重量的测定 | 第60页 |
| 5.2.5 叶片相关代谢物质的测定 | 第60-62页 |
| 5.2.6 叶片的扫描电子显微镜观察 | 第62页 |
| 5.2.7 相关调控基因的表达量检测 | 第62-64页 |
| 5.3 结果与分析 | 第64-73页 |
| 5.3.1 Rev2-6突变检测及表型观察 | 第64-66页 |
| 5.3.2 Rev2-6叶片横切面的显微观察 | 第66页 |
| 5.3.3 Rev2-6叶片横切面厚度和单位叶面积重量的测定 | 第66-67页 |
| 5.3.4 Rev2-6叶片代谢物质含量的测定 | 第67-68页 |
| 5.3.5 Rev2-6叶片表面扫面电镜观察 | 第68页 |
| 5.3.6 Rev2-6顶端分生组织发育相关基因的表达量检测 | 第68-71页 |
| 5.3.7 Rev2-6叶片极性建立相关基因的表达量检测 | 第71-72页 |
| 5.3.8 Rev2-6叶脉的不完全发育 | 第72页 |
| 5.3.9 Rev2-6调控叶片自发衰老相关基因的表达量检测 | 第72-73页 |
| 5.4 小结讨论 | 第73-75页 |
| 第六章 NTLAS,NTHB6/NTHB9对烟草打顶后腋芽生长的影响 | 第75-85页 |
| 6.1 实验材料 | 第75页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第75页 |
| 6.1.2 实验仪器设备耗材 | 第75页 |
| 6.2 实验方法及步骤 | 第75-76页 |
| 6.2.1 突变体筛选 | 第75页 |
| 6.2.2 突变体相关基因表达量检测 | 第75-76页 |
| 6.2.3 突变株打顶后腋芽生长情况统计 | 第76页 |
| 6.3 实验结果 | 第76-84页 |
| 6.3.1 突变体筛选 | 第76-77页 |
| 6.3.2 Las2-1分析 | 第77-79页 |
| 6.3.3 Rev1-3分析 | 第79-81页 |
| 6.3.4 Rev2-4分析 | 第81-84页 |
| 6.4 小结讨论 | 第84-85页 |
| 第七章 结论与展望 | 第85-87页 |
| 7.1 主要结论 | 第85-86页 |
| 7.2 讨论与展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 硕士期间参与发表论文 | 第95页 |
