| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| 1 转座子及其分类 | 第12-13页 |
| 2 DNA转座子 | 第13-15页 |
| 3 金鱼Tgf2转座子 | 第15-16页 |
| 4 研究目的及意义 | 第16-18页 |
| 第一章 金鱼Tgf2转座酶重组表达载体的构建 | 第18-30页 |
| 1 实验材料、仪器、试剂 | 第18-19页 |
| 1.1 实验材料 | 第18页 |
| 1.2 实验仪器 | 第18-19页 |
| 1.3 实验试剂 | 第19页 |
| 2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.1 试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.2 PUC57-simple-Tgf2-TPase~(83)的质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.3 目的片段Tgf2-TPase~(83)的获得 | 第21-23页 |
| 2.3.1 目的片段Tgf2-TPase~(83)的克隆 | 第21页 |
| 2.3.2 检测电泳 | 第21-22页 |
| 2.3.3 回收电泳 | 第22页 |
| 2.3.4 割胶回收 | 第22-23页 |
| 2.4 载体pET28a(+)的获得 | 第23页 |
| 2.5 连接和转化 | 第23-24页 |
| 2.5.1 连接 | 第23页 |
| 2.5.2 转化 | 第23-24页 |
| 2.6 重组转座酶菌液的PCR鉴定 | 第24页 |
| 3 实验结果 | 第24-28页 |
| 3.1 金鱼Tgf2转座酶的密码子优化 | 第24-25页 |
| 3.2 Tgf2-TPase~(83)片段的获得 | 第25-26页 |
| 3.3 pET28a(+)片段的获得 | 第26-27页 |
| 3.4 重组载体DH5α-pET28a(+)-Tgf2-TPase~(83)的构建 | 第27-28页 |
| 4 小结 | 第28-30页 |
| 第二章 重组Tgf2-TPase~(83)转座酶的表达、纯化和鉴定 | 第30-41页 |
| 1 实验材料、仪器、试剂 | 第30-31页 |
| 1.1 实验材料 | 第30页 |
| 1.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 1.3 实验试剂 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-35页 |
| 2.1 试剂配制 | 第31-33页 |
| 2.2 工程菌BL21(DE3)-pET28a(+)-Tgf2-TPase~(83)的构建 | 第33页 |
| 2.3 重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.4 重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| 2.5 重组蛋白的纯化 | 第34-35页 |
| 2.6 重组蛋白的鉴定 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.1 Tgf2-TPase~(83)在BL21(DE3)中的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.2 Tgf2-TPase~(83)蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 3.3 Tgf2-TPase~(83)蛋白的质谱鉴定 | 第37-40页 |
| 4 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 重组Tgf2-TPase~(83)转座酶的保存稳定性研究 | 第41-48页 |
| 1.实验材料、仪器、试剂 | 第41-42页 |
| 1.1 实验材料 | 第41页 |
| 1.2 实验仪器 | 第41页 |
| 1.3 实验试剂 | 第41-42页 |
| 2.实验方法 | 第42-43页 |
| 2.1 试剂的配制 | 第42页 |
| 2.2 重组蛋白样品的制备 | 第42页 |
| 2.3 重组蛋白的保存 | 第42-43页 |
| 2.4 DNase消化实验 | 第43页 |
| 3.实验结果 | 第43-47页 |
| 3.1 新鲜酶液的DNase酶活性 | 第43-44页 |
| 3.2 -80℃条件下保存7d的DNase酶活性 | 第44-45页 |
| 3.3 -80℃条件下保存14d的DNase酶活性 | 第45-46页 |
| 3.4 -80℃条件下20%甘油保存30d的DNase酶活性 | 第46-47页 |
| 4.小结 | 第47-48页 |
| 第四章 重组Tgf2-TPase~(83)转座酶的DNA结合活性研究 | 第48-58页 |
| 1.实验材料、仪器、试剂 | 第48-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第48页 |
| 1.2 实验仪器 | 第48-49页 |
| 1.3 实验试剂 | 第49页 |
| 2.实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 试剂配制 | 第49页 |
| 2.2 不同探针的制备 | 第49-50页 |
| 2.3 重组蛋白样品制备 | 第50-51页 |
| 2.4 蛋白及探针的葡聚糖凝胶层析 | 第51页 |
| 2.5 银染 | 第51-52页 |
| 3.实验结果 | 第52-56页 |
| 3.1 20%甘油保存7d、14d、30d时Tgf2-TPase~(83)的DNA结合活性 | 第52-53页 |
| 3.2 Tgf2-TPase~(83)与不同探针混合液的层析行为 | 第53-55页 |
| 3.3 蛋清溶菌酶的层析行为 | 第55页 |
| 3.4 银染结果分析 | 第55-56页 |
| 4.小结 | 第56-58页 |
| 结论与展望 | 第58-60页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| 2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
