| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| 1.1 前言 | 第13页 |
| 1.2 出芽短梗霉简介 | 第13-14页 |
| 1.3 乳酸的简介 | 第14-21页 |
| 1.3.1 乳酸的理化性质及应用 | 第14-15页 |
| 1.3.2 乳酸的合成途径及分析 | 第15-17页 |
| 1.3.3 乳酸的研究现状 | 第17-21页 |
| 1.4 乳酸脱氢酶概述 | 第21-24页 |
| 1.4.1 乳酸脱氢酶的分类 | 第21-22页 |
| 1.4.2 乳酸脱氢酶的生物来源 | 第22-23页 |
| 1.4.3 乳酸脱氢酶基因的研究进展 | 第23页 |
| 1.4.4 乳酸脱氢酶的应用 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的思路和策略 | 第24-26页 |
| 1.5.1 前期研究进展 | 第24-25页 |
| 1.5.2 本研究的意义和内容 | 第25-26页 |
| 第二章 乳酸发酵相关基因的转录组学及qPCR分析 | 第26-40页 |
| 2.1 引言 | 第26页 |
| 2.2 材料 | 第26-27页 |
| 2.2.1 供试菌株与试剂 | 第26页 |
| 2.2.2 培养基和溶液 | 第26-27页 |
| 2.2.3 仪器和设备 | 第27页 |
| 2.3 方法 | 第27-31页 |
| 2.3.1 出芽短梗霉的培养及菌体、发酵液的收集 | 第27页 |
| 2.3.2 高效液相色谱的条件及样品制备 | 第27-28页 |
| 2.3.3 总RNA的提取与cDNA第一条链的合成 | 第28-30页 |
| 2.3.4 乳酸发酵相关基因的选取及引物设计 | 第30页 |
| 2.3.5 乳酸发酵相关基因的qPCR分析 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.4.1 乳酸测定试剂盒及HPLC对乳酸发酵液的检测 | 第31-32页 |
| 2.4.2 基于转录组数据的乳酸发酵相关基因的筛选 | 第32-33页 |
| 2.4.3 乳酸发酵相关基因的qPCR结果分析 | 第33-39页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 出芽短梗霉基因comp5964的克隆及在大肠杆菌中的表达 | 第40-57页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 供试菌株与试剂 | 第40页 |
| 3.2.2 培养基和溶液 | 第40-41页 |
| 3.2.3 仪器和设备 | 第41-42页 |
| 3.3 方法 | 第42-50页 |
| 3.3.1 出芽短梗霉的培养及菌体、发酵液的收集 | 第42页 |
| 3.3.2 基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 3.3.3 总RNA提取及cDNA第一条链合成 | 第42-43页 |
| 3.3.4 出芽短梗霉NG comp5964的克隆 | 第43-45页 |
| 3.3.5 构建原核表达载体及工程菌 | 第45-46页 |
| 3.3.6 重组蛋白的诱导表达、提取纯化及检测 | 第46-48页 |
| 3.3.7 出芽短梗霉LDH酶活力的检测 | 第48-49页 |
| 3.3.8 出芽短梗霉NG comp5964的生物信息学分析 | 第49-50页 |
| 3.4 结果 | 第50-56页 |
| 3.4.1 出芽短梗霉LDH的克隆及序列分析 | 第50页 |
| 3.4.2 克隆载体DH5α-pMD-ldh的构建 | 第50-51页 |
| 3.4.3 表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.4.4 重组质粒的表达及Western Blot检测 | 第52-54页 |
| 3.4.5 重组蛋白的酶活力测定 | 第54页 |
| 3.4.6 出芽短梗霉NG comp5964的生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 重组表达蛋白的酶学性质分析 | 第57-62页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 供试菌株和试剂 | 第57页 |
| 4.2.2 仪器与设备 | 第57页 |
| 4.2.3 主要试剂配制 | 第57-58页 |
| 4.3 方法 | 第58页 |
| 4.3.1 出芽短梗霉LDH粗酶液的提取 | 第58页 |
| 4.3.2 出芽短梗霉LDH酶活性受温度的影响 | 第58页 |
| 4.3.3 出芽短梗霉LDH稳定性受温度的影响 | 第58页 |
| 4.3.4 出芽短梗霉LDH酶活性受pH的影响 | 第58页 |
| 4.3.5 出芽短梗霉LDH酶活性受金属离子的影响 | 第58页 |
| 4.4 结果 | 第58-60页 |
| 4.4.1 温度对出芽短梗霉LDH酶活性的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.2 温度对出芽短梗霉LDH稳定性的影响 | 第59页 |
| 4.4.3 不同pH对出芽短梗霉LDH酶活性的影响 | 第59-60页 |
| 4.4.4 金属离子对出芽短梗霉LDH酶活性的影响 | 第60页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第77-78页 |
