| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 虾青素的研究概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 虾青素的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.1.2 虾青素的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.1.3 虾青素的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 法夫酵母合成虾青素的研究进展 | 第16-21页 |
| 1.2.1 法夫酵母概述 | 第16页 |
| 1.2.2 法夫酵母的虾青素合成途径 | 第16-19页 |
| 1.2.3 法夫酵母合成虾青素相关基因的研究 | 第19-21页 |
| 1.3 基因敲除 | 第21-23页 |
| 1.3.1 基因敲除原理和实验流程 | 第22页 |
| 1.3.2 基因敲除的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.3 基因敲除在法夫酵母研究中的应用 | 第23页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 1.5 研究内容 | 第24-25页 |
| 1.5.1 法夫酵母crtYB基因和asy基因的克隆 | 第24页 |
| 1.5.2 法夫酵母crtYB基因和asy基因敲除载体的构建 | 第24页 |
| 1.5.3 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第24页 |
| 1.5.4 asy基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第24-25页 |
| 第2章 法夫酵母crtYB基因和asy基因的克隆 | 第25-38页 |
| 2.1 材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 菌种 | 第25页 |
| 2.1.2 仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 菌株培养 | 第27页 |
| 2.2.2 法夫酵母总DNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 crtYB基因和asy基因的克隆 | 第28页 |
| 2.2.4 PCR产物割胶回收 | 第28-29页 |
| 2.2.5 酶切处理 | 第29页 |
| 2.2.6 酶切产物回收 | 第29-30页 |
| 2.2.7 连接反应 | 第30页 |
| 2.2.8 感受态细胞制备 | 第30页 |
| 2.2.9 转化与筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.10 质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.11 重组质粒的酶切检验 | 第31-32页 |
| 2.2.12 测序 | 第32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.3.1 总DNA提取结果 | 第32页 |
| 2.3.2 crtYB基因和asy基因的克隆 | 第32-33页 |
| 2.3.3 质粒pMD-crtYB和pMD-asy的转化与筛选 | 第33-34页 |
| 2.3.4 质粒pMD-crtYB和pMD-asy的酶切检验 | 第34页 |
| 2.3.5 不同法夫酵母菌株的crtYB基因序列分析 | 第34-36页 |
| 2.3.6 不同法夫酵母菌株的asy基因序列分析 | 第36-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第3章 法夫酵母crtYB基因和asy基因敲除载体的构建 | 第38-49页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌种 | 第38页 |
| 3.1.2 仪器 | 第38页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-44页 |
| 3.2.1 菌株培养 | 第39页 |
| 3.2.2 法夫酵母总DNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.3 crtYB基因敲除载体的构建 | 第39-42页 |
| 3.2.4 asy基因敲除载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.3 实验结果 | 第44-48页 |
| 3.3.1 crtYB基因的同源臂片段的克隆 | 第44页 |
| 3.3.2 敲除质粒pMD-△crtYB的构建 | 第44-46页 |
| 3.3.3 asy基因的同源置换DNA片段的克隆 | 第46-47页 |
| 3.3.4 敲除质粒pMD-△asy的构建 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第4章 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第49-62页 |
| 4.1 材料 | 第49-51页 |
| 4.1.1 菌种 | 第49页 |
| 4.1.2 仪器 | 第49-50页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-54页 |
| 4.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 4.2.2 电转化实验 | 第51-52页 |
| 4.2.3 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第52页 |
| 4.2.4 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.5 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株物质代谢流向的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-61页 |
| 4.3.1 crtYB基因的敲除和鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3.2 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株生长的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 标准曲线的绘制 | 第56-57页 |
| 4.3.4 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第57-60页 |
| 4.3.5 crtYB基因敲除对法夫酵母菌株物质代谢流向的影响 | 第60-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第5章 asy基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第62-73页 |
| 5.1 材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 菌种 | 第62页 |
| 5.1.2 仪器 | 第62页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第62-63页 |
| 5.2 实验方法 | 第63-65页 |
| 5.2.1 酵母感受态细胞的制备 | 第63-64页 |
| 5.2.2 电转化实验 | 第64页 |
| 5.2.3 菌落PCR筛选阳性克隆 | 第64页 |
| 5.2.4 asy基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第64-65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-72页 |
| 5.3.1 asy基因的敲除与鉴定 | 第65-66页 |
| 5.3.2 asy基因敲除对法夫酵母菌株生长的影响 | 第66-67页 |
| 5.3.3 asy基因敲除对法夫酵母菌株产类胡萝卜素的影响 | 第67-72页 |
| 5.4 本章小结 | 第72-73页 |
| 第6章 结论与展望 | 第73-75页 |
| 6.1 结论 | 第73-74页 |
| 6.2 展望 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第82页 |
