| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 英文缩略语 | 第14-21页 |
| 第一部分 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应及机制研究 | 第21-43页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第23-25页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-29页 |
| 2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养 | 第26页 |
| 2.2.2 实验分组 | 第26-27页 |
| 2.2.3 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达 | 第27-28页 |
| 2.2.4 Westernblot检测TLR4、SPHK1的蛋白水平 | 第28-29页 |
| 2.2.5 免疫细胞化学法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κB的表达 | 第29页 |
| 2.2.6 细胞因子的ELISA检测按试剂盒检测说明操作 | 第29页 |
| 2.2.7 统计学分析 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-40页 |
| 3.1 小鼠腹腔巨噬细胞的培养和鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2 免疫组织化学法TRL4、SPHK1、NF-κB的表达 | 第30-31页 |
| 3.3 Westernblot法检测LPS刺激后巨噬细胞TLR4、SPHK1、NF-κB的表达 | 第31-35页 |
| 3.3.1 标准曲线的绘制和蛋白定量 | 第31-32页 |
| 3.3.2 TLR4蛋白表达 | 第32-33页 |
| 3.3.3 SPHK1蛋白表达 | 第33-34页 |
| 3.3.4 NF-κB蛋白表达 | 第34-35页 |
| 3.4 Real-timePCR检测空白组及3、6、24h时间点LPS处理组细胞中TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA的表达水平 | 第35-38页 |
| 3.4.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线 | 第35-36页 |
| 3.4.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA结果 | 第36-38页 |
| 3.5 ELISA试剂盒检测空白组及6、12、24h时间点LPS处理组细胞上清中TNF-α和IL-6的水平 | 第38-40页 |
| 3.5.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程 | 第38-39页 |
| 3.5.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 第二部分 不同浓度莫西沙星对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞的影响 | 第43-61页 |
| 1 前言 | 第43-44页 |
| 2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第44-45页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第44页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第44页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| 2.1.4 药品及免疫荧光所需试剂配制方法 | 第45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-47页 |
| 2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养 | 第45页 |
| 2.2.2 MXF对细胞毒性的影响 | 第45-46页 |
| 2.2.3 不同浓度莫西沙星对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞影响 | 第46页 |
| 2.2.4 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达 | 第46页 |
| 2.2.5 Westernblot检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的蛋白水平 | 第46页 |
| 2.2.6 免疫荧光法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κBp65的表达 | 第46-47页 |
| 2.2.7 细胞因子的ELISA检测 | 第47页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-58页 |
| 3.1 MXF对细胞毒性的影响 | 第47-48页 |
| 3.2 Realtime-PCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达 | 第48-50页 |
| 3.2.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线 | 第48-49页 |
| 3.2.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA | 第49-50页 |
| 3.3 Westernblot法检测不同浓度MXF作用后LPS刺激下巨噬细胞内TLR4、SPHK1、NF-κB的表达 | 第50-54页 |
| 3.3.1 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内TLR4蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.2 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内SHPK1蛋白表达 | 第51-52页 |
| 3.3.3 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内NF-κB蛋白表达 | 第52-54页 |
| 3.4 免疫荧光法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κB的表达及MXF对其的影响 | 第54-55页 |
| 3.5 细胞因子的ELISA检测 | 第55-58页 |
| 3.5.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程 | 第55-56页 |
| 3.5.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 第三部分 TLR4siRNA及莫西沙星对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞的影响 | 第61-82页 |
| 1 前言 | 第61-62页 |
| 2 材料与方法 | 第62-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第62页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第62页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第62页 |
| 2.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养 | 第62页 |
| 2.2.2 TLR4siRNA设计合成 | 第62-63页 |
| 2.2.3 TLR4siRNA转染 | 第63页 |
| 2.2.4 筛选出最佳TLR4siRNA序列 | 第63-64页 |
| 2.2.5 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65mRNA的表达 | 第64页 |
| 2.2.6 Westernblot检测各组细胞中TLR4、SPHK1、NF-κBp65蛋白的水平 | 第64页 |
| 2.2.7 ELISA检测各组细胞上清液中TNF-和IL-6的水平 | 第64页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第64页 |
| 3 结果 | 第64-79页 |
| 3.1 细胞转染TLR4siRNA有效片段的筛选 | 第64-68页 |
| 3.1.1 Real-timePCR | 第64-66页 |
| 3.1.2 Westernblot | 第66-68页 |
| 3.2 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65mRNA表达 | 第68-72页 |
| 3.2.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线 | 第68-69页 |
| 3.2.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA结果 | 第69-72页 |
| 3.3 Westernblot法检测各组TLR4、SPHK1、NF-κB的表达 | 第72-76页 |
| 3.3.1 不同组巨噬细胞内TLR4蛋白的表达 | 第72-74页 |
| 3.3.2 不同组巨噬细胞内SHPK1蛋白表达 | 第74-75页 |
| 3.3.3 不同组巨噬细胞内NF-κB蛋白表达 | 第75-76页 |
| 3.4 细胞因子的ELISA检测 | 第76-79页 |
| 3.4.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程 | 第76-77页 |
| 3.4.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 综述 | 第91-112页 |
| 参考文献 | 第100-112页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 个人简历 | 第114页 |
