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莫西沙星对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的影响与机制研究

摘要第4-8页
Abstract第8-13页
英文缩略语第14-21页
第一部分 LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应及机制研究第21-43页
    1 前言第21-22页
    2 材料与方法第22-29页
        2.1 实验材料第22-26页
            2.1.1 实验动物第22页
            2.1.2 主要试剂第22-23页
            2.1.3 主要仪器和设备第23-25页
            2.1.4 主要试剂的配制第25-26页
        2.2 实验方法第26-29页
            2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养第26页
            2.2.2 实验分组第26-27页
            2.2.3 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达第27-28页
            2.2.4 Westernblot检测TLR4、SPHK1的蛋白水平第28-29页
            2.2.5 免疫细胞化学法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κB的表达第29页
            2.2.6 细胞因子的ELISA检测按试剂盒检测说明操作第29页
            2.2.7 统计学分析第29页
    3 结果第29-40页
        3.1 小鼠腹腔巨噬细胞的培养和鉴定第29-30页
        3.2 免疫组织化学法TRL4、SPHK1、NF-κB的表达第30-31页
        3.3 Westernblot法检测LPS刺激后巨噬细胞TLR4、SPHK1、NF-κB的表达第31-35页
            3.3.1 标准曲线的绘制和蛋白定量第31-32页
            3.3.2 TLR4蛋白表达第32-33页
            3.3.3 SPHK1蛋白表达第33-34页
            3.3.4 NF-κB蛋白表达第34-35页
        3.4 Real-timePCR检测空白组及3、6、24h时间点LPS处理组细胞中TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA的表达水平第35-38页
            3.4.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线第35-36页
            3.4.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA结果第36-38页
        3.5 ELISA试剂盒检测空白组及6、12、24h时间点LPS处理组细胞上清中TNF-α和IL-6的水平第38-40页
            3.5.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程第38-39页
            3.5.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定第39-40页
    4 讨论第40-42页
    5 结论第42-43页
第二部分 不同浓度莫西沙星对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞的影响第43-61页
    1 前言第43-44页
    2 材料与方法第44-47页
        2.1 实验材料第44-45页
            2.1.1 实验动物第44页
            2.1.2 主要试剂第44页
            2.1.3 主要仪器和设备第44-45页
            2.1.4 药品及免疫荧光所需试剂配制方法第45页
        2.2 实验方法第45-47页
            2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养第45页
            2.2.2 MXF对细胞毒性的影响第45-46页
            2.2.3 不同浓度莫西沙星对LPS刺激小鼠腹腔巨噬细胞影响第46页
            2.2.4 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达第46页
            2.2.5 Westernblot检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的蛋白水平第46页
            2.2.6 免疫荧光法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κBp65的表达第46-47页
            2.2.7 细胞因子的ELISA检测第47页
            2.2.8 统计学分析第47页
    3 结果第47-58页
        3.1 MXF对细胞毒性的影响第47-48页
        3.2 Realtime-PCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65的mRNA表达第48-50页
            3.2.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线第48-49页
            3.2.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA第49-50页
        3.3 Westernblot法检测不同浓度MXF作用后LPS刺激下巨噬细胞内TLR4、SPHK1、NF-κB的表达第50-54页
            3.3.1 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内TLR4蛋白的表达第50-51页
            3.3.2 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内SHPK1蛋白表达第51-52页
            3.3.3 不同浓度MXF作用后LPS刺激巨噬细胞内NF-κB蛋白表达第52-54页
        3.4 免疫荧光法检测LPS刺激后TLR4、SPHK1、NF-κB的表达及MXF对其的影响第54-55页
        3.5 细胞因子的ELISA检测第55-58页
            3.5.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程第55-56页
            3.5.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定第56-58页
    4 讨论第58-60页
    5 结论第60-61页
第三部分 TLR4siRNA及莫西沙星对LPS刺激下小鼠腹腔巨噬细胞的影响第61-82页
    1 前言第61-62页
    2 材料与方法第62-64页
        2.1 实验材料第62页
            2.1.1 实验动物第62页
            2.1.2 主要试剂第62页
            2.1.3 主要仪器第62页
        2.2 实验方法第62-64页
            2.2.1 巨噬细胞的分离与纯化及培养第62页
            2.2.2 TLR4siRNA设计合成第62-63页
            2.2.3 TLR4siRNA转染第63页
            2.2.4 筛选出最佳TLR4siRNA序列第63-64页
            2.2.5 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65mRNA的表达第64页
            2.2.6 Westernblot检测各组细胞中TLR4、SPHK1、NF-κBp65蛋白的水平第64页
            2.2.7 ELISA检测各组细胞上清液中TNF-和IL-6的水平第64页
            2.2.8 统计学分析第64页
    3 结果第64-79页
        3.1 细胞转染TLR4siRNA有效片段的筛选第64-68页
            3.1.1 Real-timePCR第64-66页
            3.1.2 Westernblot第66-68页
        3.2 Real-timePCR检测TLR4、SPHK1、NF-κBp65mRNA表达第68-72页
            3.2.1 TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA扩增曲线及溶解曲线第68-69页
            3.2.2 Realtime-PCR检测各组TLR4、SPHK1、NF-κBmRNA结果第69-72页
        3.3 Westernblot法检测各组TLR4、SPHK1、NF-κB的表达第72-76页
            3.3.1 不同组巨噬细胞内TLR4蛋白的表达第72-74页
            3.3.2 不同组巨噬细胞内SHPK1蛋白表达第74-75页
            3.3.3 不同组巨噬细胞内NF-κB蛋白表达第75-76页
        3.4 细胞因子的ELISA检测第76-79页
            3.4.1 TNF-α、IL-6标准曲线测出TNF-α及IL-6标准曲线方程第76-77页
            3.4.2 各组细胞上清TNF-α、IL-6含量测定第77-79页
    4 讨论第79-81页
    5 结论第81-82页
本研究创新性的自我评价第82-83页
参考文献第83-91页
综述第91-112页
    参考文献第100-112页
攻读学位期间取得的研究成果第112-113页
致谢第113-114页
个人简历第114页

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