| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 PPARGC1A基因研究进展 | 第14-23页 |
| 1.1.1 PPARGC1A基因结构 | 第14-16页 |
| 1.1.2 PPARGC1A基因的生理功能 | 第16-21页 |
| 1.1.3 PPARGC1A基因在人类中的多态性研究 | 第21-22页 |
| 1.1.4 PPARGC1A基因在畜禽上的研究进展 | 第22-23页 |
| 1.2 腺病毒载体的研究进展 | 第23-25页 |
| 1.2.1 腺病毒生物学特性 | 第23-24页 |
| 1.2.2 腺病毒载体的发展 | 第24-25页 |
| 1.3 展望 | 第25-26页 |
| 第二章 秦川牛PPARGC1A基因克隆、过表达腺病毒载体的构建及功能验证 | 第26-46页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-33页 |
| 2.1.1 试验材料与主要试剂 | 第26页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第26页 |
| 2.1.3 RNA的提取和cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.1.4 秦川牛PPARGC1A基因CDS区克隆 | 第27页 |
| 2.1.5 pGMT-PPARGC1A载体构建 | 第27-28页 |
| 2.1.6 pAdTrack-CMV-PPARGC1A载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.1.7 pAdeasy-1-CMV-PPARGC1A载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.1.8 腺病毒Ad-PPARGC1A的包装 | 第30-31页 |
| 2.1.9 腺病毒Ad-PPARGC1A的收获及扩增 | 第31页 |
| 2.1.10 腺病毒Ad-PPARGC1A滴度的测定 | 第31页 |
| 2.1.11 最佳MOI(Multiplicity of Infection)的确定 | 第31页 |
| 2.1.12 PPARGC1A基因过表达对牛肌肉细胞代谢和分化基因表达的影响 | 第31-33页 |
| 2.2 结果与分析 | 第33-42页 |
| 2.2.1 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.2.2 秦川牛PPARGC1A基因CDS区克隆及pGMT-PPARGC1A载体构建 | 第34-36页 |
| 2.2.3 pAdTrack-CMV-PPARGC1A载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.4 pAdeasy-1-CMV-PPARGC1A载体的构建 | 第37页 |
| 2.2.5 腺病毒Ad-PPARGC1A的包装 | 第37-38页 |
| 2.2.6 腺病毒Ad-PPARGC1A的扩增及滴度测定 | 第38-39页 |
| 2.2.7 最佳MOI(Multiplicity Of Infection)的确定 | 第39页 |
| 2.2.8 PPARGC1A基因过表达后对牛肌肉细胞代谢和分化相关基因的影响 | 第39-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-45页 |
| 2.3.1 腺病毒介导的基因过表达 | 第42-43页 |
| 2.3.2 PPARGC1A基因过表达对牛肌肉细胞相关基因的影响 | 第43-45页 |
| 2.4 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 秦川牛PPARGC1A基因干扰腺病毒载体的构建及功能验证 | 第46-63页 |
| 3.1 材料与方法 | 第46-53页 |
| 3.1.1 试验材料与主要试剂 | 第46页 |
| 3.1.2 靶向PPARGC1A基因的shRNAs干扰序列的设计及合成 | 第46-48页 |
| 3.1.3 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNAs载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.1.4 pDsRed1-C1-PPARGC1A表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.1.5 有效shRNAs序列的筛选 | 第50-51页 |
| 3.1.6 pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNAs重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.1.7 腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第52页 |
| 3.1.8 最佳MOI(Multiplicity Of Infection)的确定 | 第52页 |
| 3.1.9 PPARGC1A基因沉默后对肌肉细胞代谢和分化相关基因表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.2 结果与分析 | 第53-60页 |
| 3.2.1 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNAs载体的构建 | 第53页 |
| 3.2.2 pDsRed1-C1-PPARGC1A载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.2.3 有效shRNAs序列的筛选 | 第54-55页 |
| 3.2.4 pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNAs重组腺病毒骨架载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.5 腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第56-57页 |
| 3.2.6 最佳MOI(Multiplicity Of Infection)的确定 | 第57页 |
| 3.2.7 PPARGC1A基因沉默后对肌肉细胞代谢和分化相关基因表达的影响 | 第57-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-62页 |
| 3.3.1 腺病毒载体介导的RNAi | 第60-61页 |
| 3.3.2 干扰腺病毒对牛肌肉细胞代谢和增殖分化相关基因的影响 | 第61-62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 秦川牛PPARGC1A基因启动子区的克隆及活性研究 | 第63-77页 |
| 4.1 材料与方法 | 第63-68页 |
| 4.1.1 试验材料与主要试剂 | 第63页 |
| 4.1.2 引物设计与合成 | 第63页 |
| 4.1.3 秦川牛全血DNA的提取 | 第63-64页 |
| 4.1.4 秦川牛PPARGC1A基因启动子区全长扩增 | 第64页 |
| 4.1.5 pGMT-Promoter载体的构建 | 第64-65页 |
| 4.1.6 pGL3-Basic-Promoter不同截短载体的构建 | 第65-67页 |
| 4.1.7 pRL-TK和pGL3-Control载体的扩增与纯化 | 第67页 |
| 4.1.8 HEK293和C2C12细胞的培养 | 第67页 |
| 4.1.9 pGL3-Basic-Promoter重组系列质粒与对照质粒pR-TK共转染HEK293和C2C12细胞 | 第67-68页 |
| 4.1.10 荧光素酶活性检测 | 第68页 |
| 4.2 结果与分析 | 第68-75页 |
| 4.2.1 秦川牛PPARGC1A基因启动子区全长扩增 | 第68页 |
| 4.2.2 pGMT-Promoter载体的构建 | 第68-70页 |
| 4.2.3 pGL3-Basic-Promoter不同截短载体的构建 | 第70-72页 |
| 4.2.4 荧光素酶活性检测 | 第72-75页 |
| 4.3 讨论 | 第75-76页 |
| 4.3.1 秦川牛PPARGC1A基因启动子活性在HEK293及C2C12细胞系中的差异 | 第75页 |
| 4.3.2 秦川牛PPARGC1A基因启动子不同截短体的活性差异 | 第75-76页 |
| 4.4 小结 | 第76-77页 |
| 第五章 牛PPARGC1A基因遗传变异及其与生长性状的关联分析 | 第77-95页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-81页 |
| 5.1.1 实验动物与主要试剂 | 第77-78页 |
| 5.1.2 血液样品中基因组DNA提取 | 第78页 |
| 5.1.3 引物设计及PCR反应 | 第78-80页 |
| 5.1.4 利用DNA池技术扫描SNPs | 第80页 |
| 5.1.5 利用PCR-SSCP和PCR-RFLP检测突变在群体中的分布规律 | 第80页 |
| 5.1.6 数据统计分析模型 | 第80-81页 |
| 5.2 结果与分析 | 第81-93页 |
| 5.2.1 牛血液样品中基因组DNA的提取 | 第81页 |
| 5.2.2 PCR扩增结果 | 第81-83页 |
| 5.2.3 DNA池扫描SNPs | 第83-87页 |
| 5.2.4 不同SNPs分型结果 | 第87-89页 |
| 5.2.5 PPARGC1A基因多态位点频率分布的群体遗传学分析 | 第89-92页 |
| 5.2.6 PPARGC1A基因SNPs与牛生长性状的关联分析 | 第92-93页 |
| 5.3 讨论 | 第93-94页 |
| 5.3.1 PPARGC1A基因多态性在中国地方牛品种与外国牛品种的比较 | 第93页 |
| 5.3.2 牛PPARGC1A基因多态性与生长性状之间的关联 | 第93-94页 |
| 5.4 小结 | 第94-95页 |
| 第六章 结论与创新点 | 第95-96页 |
| 6.1 结论 | 第95页 |
| 6.2 创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-105页 |
| 附录 | 第105-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 作者简介 | 第119-120页 |
