| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 研究背景 | 第14-34页 |
| 1 微生物油脂 | 第14页 |
| 2 产油微生物 | 第14-20页 |
| 2.1 产油酵母菌 | 第14-17页 |
| 2.1.1 油脂酵母菌类群 | 第14-15页 |
| 2.1.2 酵母菌油脂中脂肪酸成分 | 第15-16页 |
| 2.1.3 影响油脂酵母菌合成油脂的因素 | 第16-17页 |
| 2.2 产油霉菌 | 第17-19页 |
| 2.2.1 产油霉菌的类群 | 第17-18页 |
| 2.2.2 霉菌油脂水平 | 第18-19页 |
| 2.3 产油藻类 | 第19页 |
| 2.4 产油细菌 | 第19-20页 |
| 3 微生物油脂合成与调控 | 第20-24页 |
| 3.1 油脂合成途径 | 第20-21页 |
| 3.2 油脂合成的关键酶 | 第21-22页 |
| 3.3 氮源限制条件对油脂合成的调控 | 第22-23页 |
| 3.4 其它条件对油脂合成的调控 | 第23-24页 |
| 4 微生物油脂的发酵工艺 | 第24-30页 |
| 4.1 油脂发酵的原料 | 第24-28页 |
| 4.1.1 单糖类 | 第24-25页 |
| 4.1.2 淀粉类 | 第25-26页 |
| 4.1.3 菊糖类 | 第26-27页 |
| 4.1.4 木质纤维素类 | 第27页 |
| 4.1.5 工业有机废弃物类 | 第27-28页 |
| 4.2 油脂发酵的方式 | 第28-29页 |
| 4.3 油脂提取方法 | 第29-30页 |
| 5 微生物油脂应用领域 | 第30-31页 |
| 5.1 制备生物柴油 | 第30页 |
| 5.2 生产多不饱和脂肪酸 | 第30-31页 |
| 6 微生物油脂发酵问题和展望 | 第31-32页 |
| 6.1 微生物油脂合成与调控 | 第31页 |
| 6.2 有效利用非粮食原料 | 第31页 |
| 6.3 提高碳源向油脂的合成效率 | 第31-32页 |
| 7 论文立项依据和研究内容 | 第32-34页 |
| 第二章 高油脂水平季也蒙毕赤酵母 Pcla22 菌株的菌种鉴定 | 第34-47页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.1 材料 | 第34-35页 |
| 2.1.1 菌株 | 第34页 |
| 2.1.2 培养基 | 第34-35页 |
| 2.1.3 试剂 | 第35页 |
| 2.2 方法 | 第35-37页 |
| 2.2.1 菌体培养方法 | 第35页 |
| 2.2.2 油脂测定方法 | 第35-36页 |
| 2.2.3 菌体干重测定 | 第36页 |
| 2.2.4 油滴染色方法 | 第36页 |
| 2.2.5 形态学鉴定 | 第36页 |
| 2.2.6 生理生化鉴定 | 第36页 |
| 2.2.7 26S rDNA 分子生物学鉴定 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-46页 |
| 3.1 酵母菌 Pcla22 菌株油脂含量 | 第37-39页 |
| 3.2 酵母菌 Pcla22 菌株的细胞形态和菌落特征 | 第39-40页 |
| 3.3 酵母菌 Pcla22 菌株的生理生化特征 | 第40-42页 |
| 3.4 酵母菌 Pcla22 菌株基因组 DNA 电泳图 | 第42-43页 |
| 3.5 26S rDNAPCR 产物电泳图 | 第43页 |
| 3.6 酵母菌 Pcla22 的 26S rDNA 序列分析 | 第43-45页 |
| 3.7 讨论 | 第45-46页 |
| 4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第三章 季也蒙毕赤酵母菌 Pcla22 发酵菊糖产油脂的研究 | 第47-59页 |
| 1 前言 | 第47页 |
| 2 材料与方法 | 第47-50页 |
| 2.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 2.1.1 菌株 | 第47-48页 |
| 2.1.2 培养基 | 第48页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第48页 |
| 2.2 方法 | 第48-50页 |
| 2.2.1 油脂测定方法 | 第48页 |
| 2.2.2 菌体干重测定 | 第48-49页 |
| 2.2.3 还原糖和总糖测定方法 | 第49页 |
| 2.2.4 菊糖酶活测定方法 | 第49页 |
| 2.2.5 发酵罐补料培养 | 第49页 |
| 2.2.6 脂肪酸甲酯化制备 | 第49-50页 |
| 2.2.7 生物柴油制备方法 | 第50页 |
| 3 结果与讨论 | 第50-58页 |
| 3.1 碳源对菌体及油脂产量的影响 | 第50-51页 |
| 3.2 氮源对菌体及油脂产量的影响 | 第51-52页 |
| 3.3 不同碳氮比对菌体及油脂产量的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 分批补料发酵 | 第53-55页 |
| 3.5 脂肪酸分析 | 第55-56页 |
| 3.6 生物柴油制备 | 第56-58页 |
| 4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 增强丙酮酸羧化反应提高了 P. guilliermondii TJY22 产油脂水平 | 第59-78页 |
| 1 前言 | 第59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 2.1.1 菌株 | 第59-60页 |
| 2.1.2 培养基 | 第60页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第60页 |
| 2.2 方法 | 第60-64页 |
| 2.2.1 油脂测定方法 | 第60页 |
| 2.2.2 菌体干重测定 | 第60页 |
| 2.2.3 胞内酶液提取方法 | 第60-61页 |
| 2.2.4 总 RNA 提取方法 | 第61页 |
| 2.2.5 荧光定量 PCR 方法 | 第61-63页 |
| 2.2.6 还原糖和总糖测定方法 | 第63页 |
| 2.2.7 酶活测定方法 | 第63-64页 |
| 2.2.8 发酵罐培养方法 | 第64页 |
| 2.2.9 脂肪酸甲酯化方法 | 第64页 |
| 3 结果与讨论 | 第64-77页 |
| 3.1 不同季也蒙毕赤酵母菌株的油脂水平比较 | 第64-65页 |
| 3.2 检测提取的 RNA | 第65-66页 |
| 3.3 荧光电泳扩增曲线 | 第66-67页 |
| 3.4 Pcla22 菌株和 TJY22 菌株油脂代谢关键酶基因的转录水平比较 | 第67-70页 |
| 3.5 培养基中添加碳酸钙对季也蒙毕赤酵母菌油脂累积的影响 | 第70-73页 |
| 3.6 碳酸钙对 TJY22 和 Pcla22 菌株丙酮酸羧化酶酶活力的影响 | 第73-74页 |
| 3.7 发酵罐分批补料发酵 | 第74-75页 |
| 3.8 脂肪酸分析 | 第75-77页 |
| 4 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 丙酮酸羧化酶在油脂合成调控中的作用 | 第78-102页 |
| 1 前言 | 第78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-84页 |
| 2.1 实验材料 | 第78-79页 |
| 2.1.1 质粒和菌株 | 第78页 |
| 2.1.2 培养基 | 第78-79页 |
| 2.2 方法 | 第79-84页 |
| 2.2.1 试剂配制方法 | 第79-80页 |
| 2.2.2 季也蒙毕赤酵母丙酮酸羧化酶基因表达质粒构建 | 第80-83页 |
| 2.2.3 醋酸锂方法转化酵母 | 第83页 |
| 2.2.4 胞内酶液提取方法 | 第83页 |
| 2.2.5 酶活测定方法 | 第83-84页 |
| 2.2.6 油脂测定方法 | 第84页 |
| 2.2.7 生物量测定方法 | 第84页 |
| 2.2.8 柠檬酸测定方法 | 第84页 |
| 2.2.9 发酵罐培养方法 | 第84页 |
| 3 结果与讨论 | 第84-100页 |
| 3.1 基因组提取 | 第84-85页 |
| 3.2 克隆丙酮酸羧化酶基因 PYC 和 ATP 柠檬酸裂解酶基因 ACL1 | 第85-86页 |
| 3.3 验证构建质粒 | 第86-88页 |
| 3.4 转化解脂耶罗维亚酵母菌（ura）尿嘧啶缺陷型 | 第88页 |
| 3.5 筛选丙酮酸羧化酶基因 PYC 转化子 | 第88-89页 |
| 3.6 筛选 PYC 基因和 ACL1 基因共转化子 | 第89-91页 |
| 3.7 PCR 验证基因组 | 第91-92页 |
| 3.8 丙酮酸羧化酶酶活 | 第92页 |
| 3.9 ATP 柠檬酸裂解酶酶活及 ACL1 基因表达水平 | 第92-93页 |
| 3.10 胞内油滴观察 | 第93-94页 |
| 3.11 碳酸钙对野生型和转化子发酵性能的影响 | 第94-98页 |
| 3.12 转化子 PA56 发酵罐分批培养 | 第98-100页 |
| 4 本章小结 | 第100-102页 |
| 全文总结与创新点 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-118页 |
| 附录 | 第118-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 发表的学术论文 | 第121-122页 |
| 个人简历 | 第122-123页 |
