| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 RNA沉默与植物病毒 | 第12-19页 |
| 1.1.1 RNA沉默 | 第12-13页 |
| 1.1.2 RNA沉默的作用机制 | 第13-14页 |
| 1.1.3 病毒RNA沉默抑制子 | 第14-15页 |
| 1.1.4 病毒RNA沉默抑制子的作用机制 | 第15-18页 |
| 1.1.5 RNA沉默在抗病毒中的应用 | 第18-19页 |
| 1.2 甘蔗条纹花叶病毒及其P1蛋白结构和功能 | 第19-20页 |
| 1.2.1 甘蔗条纹花叶病毒基因组结构 | 第19页 |
| 1.2.2 甘蔗条纹花叶病毒基因功能 | 第19页 |
| 1.2.3 不同植物病毒P1蛋白沉默抑制子功能 | 第19-20页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-35页 |
| 2.1 植物材料与培养条件 | 第22页 |
| 2.2 质粒及菌株 | 第22页 |
| 2.3 试剂及配制 | 第22-23页 |
| 2.3.1 相关试剂 | 第22-23页 |
| 2.3.2 所有溶液配制 | 第23页 |
| 2.4 载体构建 | 第23-29页 |
| 2.4.1 pGD-3xflag-SCSMV P1/HC-Pro双元表达载体 | 第23页 |
| 2.4.2 片段缺失载体构建 | 第23-26页 |
| 2.4.3 点突变系列载体构建 | 第26页 |
| 2.4.4 酵母双杂交载体构建 | 第26-28页 |
| 2.4.5 双分子荧光互补载体构建 | 第28-29页 |
| 2.5 质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.6 农杆菌介导的瞬时表达 | 第30-31页 |
| 2.6.1 农杆菌转化 | 第30页 |
| 2.6.2 农杆菌介导瞬时表达 | 第30-31页 |
| 2.7 长波紫外灯观察与拍照 | 第31页 |
| 2.8 Western blot | 第31-32页 |
| 2.8.1 蛋白提取 | 第31页 |
| 2.8.2 Bio-Rad蛋白定量 | 第31页 |
| 2.8.3 Western杂交 | 第31-32页 |
| 2.9 酵母双杂交(Y2H) | 第32-33页 |
| 2.9.1 酵母感受态的制备 | 第32-33页 |
| 2.9.2 酵母同源重组转化及鉴定 | 第33页 |
| 2.10 双分子荧光互补(BiFC) | 第33-34页 |
| 2.11 蛋白质结构预测 | 第34-35页 |
| 第三章 结果与分析 | 第35-55页 |
| 3.1 SCSMV P1沉默抑制子抑制局部GFP基因沉默 | 第35-36页 |
| 3.2 HC-Pro会削弱P1沉默抑制子活性 | 第36-38页 |
| 3.3 P1蛋白与HC-Pro蛋白之间互作验证 | 第38-40页 |
| 3.3.1 Y2H验证P1与HC-Pro之间蛋白互作 | 第38-39页 |
| 3.3.2 BiFC验证P1与HC-Pro无直接互作 | 第39-40页 |
| 3.4 SCSMV-P1蛋白功能生物信息学预测分析 | 第40-47页 |
| 3.4.1 SCSMV-P1蛋白理化性质 | 第40-41页 |
| 3.4.2 SCSMV-P1蛋白磷酸化位点预测 | 第41页 |
| 3.4.3 SCSMV-P1蛋白亲疏水性和跨膜区,跨膜方向预测 | 第41-42页 |
| 3.4.4 SCSMV-P1蛋白二级结构预测 | 第42-43页 |
| 3.4.5 SCSMV-P1保守结构域分析 | 第43-44页 |
| 3.4.6 SCSMV-P1选择压力分析 | 第44-45页 |
| 3.4.7 SCSMV-P1保守位点分析 | 第45-46页 |
| 3.4.8 SCSMV-P1蛋白三级结构预测分析 | 第46-47页 |
| 3.5 SCSMV-P1抑制RNA沉默的关键氨基酸及功能域定位 | 第47-55页 |
| 3.5.1 SCSMV-P1片段缺失和点突变载体构建及测序验证 | 第47-49页 |
| 3.5.2 SCSMV-P1全序列分段突变体抑制RNA沉默活性分析 | 第49-50页 |
| 3.5.3 SCSMV-P1保守结构域缺失突变体抑制RNA沉默活性分析 | 第50-52页 |
| 3.5.4 SCSMV-P1点突变体抑制RNA沉默活性分析 | 第52-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-59页 |
| 4.1 SCSMV编码的P1蛋白是RNA沉默抑制子 | 第55页 |
| 4.2 HC-Pro对P1抑制RNA沉默的影响 | 第55-56页 |
| 4.3 影响P1沉默抑制子活性功能结构域和关键氨基酸残基 | 第56-59页 |
| 第五章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 5.1 结论 | 第59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附录 | 第67-77页 |
| 攻读学位期间的学术论文与研究成果 | 第77页 |
