| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 线虫SMN1同源基因smn-1是一个重要的剪接因子 | 第12-30页 |
| 1.1 实验材料与试剂 | 第13-17页 |
| 1.1.1 主要实验仪器 | 第13-14页 |
| 1.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第14-15页 |
| 1.1.3 主要实验试剂的配制 | 第15-17页 |
| 1.1.4 实验用线虫品系、菌株及质粒 | 第17页 |
| 1.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 1.2.1 收集用于提取RNA的smn-(ok355△)等线虫 | 第17-18页 |
| 1.2.2 制备总RNA | 第18-19页 |
| 1.2.3 RT-PCR检测tos-1的剪接 | 第19-20页 |
| 1.2.4 RNAi减少smn-1、uaf-1和sfa-1的表达,检测对tos-1剪接的影响 | 第20页 |
| 1.2.5 显微注射获得表达SMN-1::GFP融合蛋白的N2转基因线虫 | 第20-22页 |
| 1.2.6 用smn-1 RNAi转基因线虫macEx[Pmyo-3 smn-1::GFP]和macEx[Pmyo-3 GFP]检测smn-1 RNAi效果 | 第22-23页 |
| 1.2.7 显微注射获得tos-1转基因的smn-1(ok355△)I/hT2(Ⅰ;Ⅲ)线虫 | 第23页 |
| 1.2.8 RT-PCR检测tos-1 3’剪接位点突变对其剪接影响 | 第23-24页 |
| 1.3 实验结果 | 第24-30页 |
| 1.3.1 smn-1功能缺失型突变导致tos-1的剪接发生改变 | 第24-26页 |
| 1.3.2 弱3’剪接位点的有效剪接需要smn-1 | 第26-29页 |
| 1.3.3 uay-1(n4588)与smn-1(ok355△)对tos-1内含子1保留有累加效应 | 第29-30页 |
| 第二章 uaf-1突变改善smn-1(ok355△)突变体的寿命和运动功能 | 第30-39页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.2.1 测量线虫身体长度 | 第30-31页 |
| 2.2.2 测量线虫寿命 | 第31页 |
| 2.2.3 Bodybends实验 | 第31页 |
| 2.2.4 Thrashing实验 | 第31-32页 |
| 2.2.5 咽部pumping实验 | 第32页 |
| 2.2.6 用uaf-1 RNAi菌处理smn-1(ok355△)线虫,测量其生存时间和bodybends | 第32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-39页 |
| 2.3.1 uaf-1突变延长smn-1(ok355△)突变体的寿命 | 第32-33页 |
| 2.3.2 uaf-1突变改善了smn-1(ok355△)突变体的运动功能 | 第33-39页 |
| 第三章 smn-1(ok355△)不同程度地影响U snRNA的表达 | 第39-44页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第39页 |
| 3.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第39页 |
| 3.1.3 RT-qPCR引物列表 | 第39-40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.2.1 用RT-qPCR实验检测U snRNA的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.2 用RT-PCR实验检测U6 snRNA的表达 | 第41页 |
| 3.3 实验结果 | 第41-44页 |
| 3.3.1 smn-1不同程度地影响剪接体snRNA的表达 | 第41-44页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第44-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 综述 | 第53-70页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士学位期间主要研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
