| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 缩略词 | 第6-8页 |
| 第一章 概述 | 第8-13页 |
| 1.1 前言 | 第8-9页 |
| 1.2 痘苗病毒载体 | 第9-10页 |
| 1.2.1 痘苗病毒的生物学特点 | 第9页 |
| 1.2.2 重组痘苗病毒载体的特点 | 第9-10页 |
| 1.2.3 溶瘤痘苗病毒的改造 | 第10页 |
| 1.3 IL-24基因 | 第10页 |
| 1.4 Smac/DIABLO基因 | 第10-11页 |
| 1.5 连接子简介 | 第11-12页 |
| 1.6 本课题研究介绍 | 第12-13页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第13-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第13-16页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及病毒 | 第13页 |
| 2.1.2 实验试剂及工具酶 | 第13页 |
| 2.1.3 引物设计及合成 | 第13-15页 |
| 2.1.4 主要细胞株 | 第15页 |
| 2.1.5 主要溶液和配制 | 第15-16页 |
| 2.2 实验方法 | 第16-29页 |
| 2.2.1 分子克隆部分 | 第16-22页 |
| 2.2.2 重组痘苗病毒构建部分 | 第22-25页 |
| 2.2.3 细胞实验部分 | 第25-29页 |
| 第三章 试验结果 | 第29-38页 |
| 3.1 真核表达质粒PcDNA3.1(+)IL-24-F2A-Smac、PcDNA3.1(+)IL-24-IETD-Smac、PcDNA3.1 (+)IL-24-EEED-Smac的鉴定 | 第29页 |
| 3.2 F2A连接子剪切效果优于IETD、EEED连接子 | 第29-30页 |
| 3.3 F2A的剪切效率依赖于caspase活性 | 第30-32页 |
| 3.3.1 Caspase的活化提高了F2A连接子的剪切效率并显著优于IETD/EEED连接子 | 第30页 |
| 3.3.2 F2A连接子的剪切效率与caspase活化成正相关 | 第30-32页 |
| 3.4 IETD/EEED连接子多肽加剧了上游IL-24蛋白泛素化降解 | 第32-33页 |
| 3.5 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 3.6 重组溶瘤痘苗病毒的鉴定 | 第33-35页 |
| 3.6.1 重组溶瘤痘苗病毒目的基因的鉴定 | 第34页 |
| 3.6.2 重组溶瘤痘苗病毒野毒的鉴定 | 第34-35页 |
| 3.7 Western Blot检测重组溶瘤痘苗病毒插入目的基因的表达 | 第35-36页 |
| 3.8 MTT检测重组溶瘤痘苗病毒对肿瘤细胞的杀伤作用 | 第36-38页 |
| 第四章 讨论 | 第38-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 致谢 | 第45页 |
