| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 符号说明 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| 1 猪关节炎的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.1 主要病原 | 第16页 |
| 1.2 临床症状 | 第16-17页 |
| 1.3 诊断检测 | 第17页 |
| 1.4 预防治疗 | 第17页 |
| 2 猪链球菌 | 第17-22页 |
| 2.1 病原学 | 第18页 |
| 2.2 主要致病因子 | 第18-20页 |
| 2.2.1 荚膜多糖 | 第18-19页 |
| 2.2.2 溶血素 | 第19页 |
| 2.2.3 谷氨酸脱氢酶 | 第19页 |
| 2.2.4 溶菌酶释放蛋白 | 第19-20页 |
| 2.2.5 细胞外因子 | 第20页 |
| 2.2.6 第二开放式阅读框 | 第20页 |
| 2.2.7 纤连蛋白结合蛋白 | 第20页 |
| 2.3 流行病学及危害 | 第20-22页 |
| 3 副猪嗜血杆菌 | 第22-28页 |
| 3.1 病原学 | 第23页 |
| 3.2 主要致病因子 | 第23-26页 |
| 3.2.1 37Kda蛋白 | 第23-24页 |
| 3.2.2 荚膜 | 第24页 |
| 3.2.3 脂低聚糖（LOS） | 第24页 |
| 3.2.4 神经氨酸酶 | 第24-25页 |
| 3.2.5 转铁结合蛋白基因 | 第25页 |
| 3.2.6 6-磷酸葡萄糖脱氢酶 | 第25页 |
| 3.2.7 免疫球蛋白蛋白酶A | 第25页 |
| 3.2.8 三聚体转运蛋白 | 第25-26页 |
| 3.3 流行病学及危害 | 第26-28页 |
| 4 多重PCR技术研究进展 | 第28-29页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 猪链球菌2型和副猪嗜血杆菌二重PCR检测方法的建立及应用 | 第30-40页 |
| 1 材料 | 第30-31页 |
| 1.1 菌株与样品采集 | 第30页 |
| 1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
| 1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 2 链球菌2型和副猪嗜血杆菌二重PCR方法的建立 | 第31-36页 |
| 2.1 引物 | 第31页 |
| 2.2 细菌培养 | 第31-32页 |
| 2.3 细菌DNA提取 | 第32页 |
| 2.4 DNA浓度测定 | 第32页 |
| 2.5 猪链球菌2型cps2J基因PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.6 副猪嗜血杆菌 16s rRNA基因PCR扩增 | 第33页 |
| 2.7 cps2J基因和 16s rRNA基因PCR产物回收 | 第33页 |
| 2.8 重组质粒标准品的制备 | 第33-34页 |
| 2.8.1 DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 2.8.2 目的基因与载体的连接 | 第34页 |
| 2.8.3 重组质粒的转化 | 第34页 |
| 2.8.4 重组质粒的提取和鉴定 | 第34页 |
| 2.9 链球菌2型、副猪嗜血杆菌二重PCR方法的优化 | 第34-36页 |
| 2.9.1 退火温度优化 | 第35页 |
| 2.9.2 引物浓度优化 | 第35页 |
| 2.9.3 特异性试验 | 第35页 |
| 2.9.4 灵敏性试验 | 第35页 |
| 2.9.5 临床样品检测 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-39页 |
| 3.1 目的片段的克隆与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 链球菌2型与副猪嗜血杆菌二重PCR方法退火温度优化 | 第37页 |
| 3.3 链球菌2型与副猪嗜血杆菌二重PCR方法引物浓度优化 | 第37页 |
| 3.4 链球菌2型与副猪嗜血杆菌二重PCR特异性试验 | 第37-38页 |
| 3.5 链球菌2型与副猪嗜血杆菌二重PCR灵敏度试验 | 第38-39页 |
| 3.6 样品PCR检测结果 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第三章 华东地区部分猪场链球菌2型毒力因子分布研究 | 第40-56页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 菌株与样品采集 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 2 华东地区部分猪场链球菌毒力因子PCR检测 | 第41-44页 |
| 2.1 引物 | 第41-42页 |
| 2.2 细菌培养 | 第42页 |
| 2.3 细菌DNA提取 | 第42页 |
| 2.4 样品链球菌检测 | 第42页 |
| 2.5 cps2J基因、ef基因和gdh基因三重PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 2.6 sly基因、mrp基因、orf2基因和gadph基因四重PCR鉴定 | 第43页 |
| 2.7 链球菌2型cps2J基因产物回收 | 第43页 |
| 2.8 目的基因与载体的连接 | 第43-44页 |
| 2.9 重组质粒的转化 | 第44页 |
| 2.10 链球菌2型cps2J序列分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-54页 |
| 3.1 et-tu基因PCR检测链球菌 | 第44-45页 |
| 3.2 cps2J基因、ef基因、gdh基因三重PCR | 第45页 |
| 3.3 sly基因、mrp基因、orf2基因、gadph基因4重PCR | 第45-46页 |
| 3.4 毒力因子分布分析 | 第46-47页 |
| 3.5 分离株cps2J基因序列分析 | 第47-53页 |
| 3.6 cps基因进化树分析（聚类分析） | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌临床分离株RFLP-PCR分型 | 第56-62页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| 1.1 样品 | 第56页 |
| 1.2 主要试剂 | 第56页 |
| 1.3 主要仪器 | 第56-57页 |
| 2 副猪嗜血杆菌分离株RFLP-PCR分型 | 第57-59页 |
| 2.1 引物 | 第57页 |
| 2.2 细菌培养 | 第57页 |
| 2.3 细菌DNA提取 | 第57页 |
| 2.4 副猪嗜血杆菌分离株tbpA基因PCR扩增 | 第57-58页 |
| 2.5 副猪嗜血杆菌tbpA基因PCR产物回收 | 第58页 |
| 2.6 tbpA基因TaqⅠ、AvaⅠ、RsaⅠ内切分型 | 第58页 |
| 2.7 内切酶图谱分析 | 第58-59页 |
| 3 结果 | 第59-60页 |
| 3.1 分离株tbpA基因PCR扩增结果 | 第59页 |
| 3.2 tbpA基因酶切结果 | 第59页 |
| 3.3 副猪嗜血杆菌分离株RFLP-PCR基因型命名结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 猪链球菌、副猪嗜血杆菌临床分离株药敏试验 | 第62-68页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| 1.1 样品 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63页 |
| 2.1 细菌培养 | 第63页 |
| 2.2 药敏试验 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-66页 |
| 3.1 抑菌环直径测量试验 | 第63页 |
| 3.2 链球菌和副猪嗜血杆菌耐药性分析 | 第63-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 第六章 结论与展望 | 第68-70页 |
| 1 结论 | 第68页 |
| 2 未来研究的展望 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 附录1 试剂的配置 | 第80-81页 |
| 附录2 细菌基因组DNA快速提取试剂盒DN11说明书 | 第81-82页 |
| 附录3 AXYPREP DNA凝胶回收试剂盒说明书 | 第82-83页 |
| 附录4 小量AXYPREP质粒提取试剂盒说明书 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文 | 第86-88页 |
