| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩写词表 | 第9-14页 |
| 一、文献综述 | 第14-20页 |
| 1. 我国黑莓产业发展现状及价值体现 | 第14-15页 |
| 1.1 我国黑莓产业发展现状 | 第14-15页 |
| 1.2 黑莓的营养价值及经济价值 | 第15页 |
| 2. 花青素和原花青素的合成途径及转运机制研究 | 第15-18页 |
| 2.1 花青素苷和原花青素的作用 | 第15-16页 |
| 2.2 花青素苷和原花青素的生物合成 | 第16-17页 |
| 2.3 花青素苷和原花青素的转运机制研究 | 第17-18页 |
| 3. MATE基因家族研究现状 | 第18-19页 |
| 4. TT12基因功能研究现状 | 第19-20页 |
| 二、引言 | 第20-22页 |
| 1. 研究目标 | 第20页 |
| 2. 主要研究内容 | 第20-21页 |
| 3. 技术路线 | 第21-22页 |
| 三、RuTT12-1基因的克隆及生物学信息学分析 | 第22-36页 |
| 1. 材料与方法 | 第23-26页 |
| 1.1 材料 | 第23页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 1.3 试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| 1.4 实验方法 | 第24-26页 |
| 1.4.1 总RNA的提取 | 第24页 |
| 1.4.2 引物设计 | 第24页 |
| 1.4.3 目的基因克隆 | 第24-26页 |
| 1.4.3.1 cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 1.4.3.2 黑莓TT12基因的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 1.4.4 序列分析 | 第26页 |
| 2. 结果与分析 | 第26-35页 |
| 2.1 RuTT12-1基因的全长序列扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.1 总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.1.2 RuTT12-1基因的全长克隆 | 第27页 |
| 2.2 RuTT12-1基因的生物学信息分析 | 第27-35页 |
| 2.2.1 RuTT12-1基因编码的氨基酸序列分析 | 第27-30页 |
| 2.2.2 RuTT12-1基因与部分植物TT12基因的进化树分析 | 第30-31页 |
| 2.2.3 RuTT12-1基因编码的氨基酸序列的结构域分析 | 第31-34页 |
| 2.2.4 RuTT12-1基因编码的氨基酸序列的二级与三级结构分析 | 第34-35页 |
| 3. 讨论 | 第35-36页 |
| 四、RuTT12-1基因的密码子偏好性分析 | 第36-51页 |
| 1. 材料与方法 | 第37-38页 |
| 1.1 目的基因序列的获得 | 第37页 |
| 1.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 1.2.1 密码子使用特性分析 | 第37页 |
| 1.2.2 与其他常用物种基因组密码子偏好性比较 | 第37-38页 |
| 1.2.3 植物TT12基因的聚类分析 | 第38页 |
| 1.2.4 最优密码子分析 | 第38页 |
| 2. 结果与分析 | 第38-50页 |
| 2.1 RuTT12-1基因密码子偏好性分析 | 第38-44页 |
| 2.2 与其他常见异源宿主基因组密码子偏好性比较 | 第44-46页 |
| 2.3 与不同物种T12基因密码子偏好性的比较 | 第46-50页 |
| 2.3.1 密码子组成和使用偏好性各参数分析 | 第46-47页 |
| 2.3.2 基于不同物种TT12基因密码子偏好性的聚类分析 | 第47-50页 |
| 2.4 RuTT12-1基因最优密码子的确定 | 第50页 |
| 3. 讨论 | 第50-51页 |
| 五、RuTT12-1基因原核表达载体构建与表达 | 第51-58页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-54页 |
| 1.1 菌株 | 第51页 |
| 1.2 质粒 | 第51页 |
| 1.3 试剂和试剂盒 | 第51页 |
| 1.4 实验方法 | 第51-54页 |
| 1.4.1 pET-32a(+)原核表达载体的构建 | 第51-53页 |
| 1.4.2 pEasy-Blunt E1原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 1.4.3 RuTT12-1蛋白的诱导表达及检测 | 第54页 |
| 2. 结果与分析 | 第54-57页 |
| 2.1 pET-32a+原核表达载体构建 | 第54-55页 |
| 2.2 pEasy-Blunt E1原核表达载体构建 | 第55页 |
| 2.3 RuTT12-1蛋白的诱导表达与分析 | 第55-57页 |
| 3. 讨论 | 第57-58页 |
| 六、RuTT12-1基因过表达载体构建及拟南芥遗传转化 | 第58-71页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-65页 |
| 1.1 材料 | 第58页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第58页 |
| 1.3 试剂和试剂盒 | 第58页 |
| 1.4 实验方法 | 第58-65页 |
| 1.4.1 pCAMBIA1301~+过核表达载体的构建 | 第58-61页 |
| 1.4.2 拟南芥转化(花序浸染法) | 第61-62页 |
| 1.4.3 转基因拟南芥阳性苗鉴定 | 第62-63页 |
| 1.4.3.1 阳性植株叶片基因组DNA的提取 | 第62-63页 |
| 1.4.3.2 阳性植株鉴定 | 第63页 |
| 1.4.4 转基因拟南芥原花青素和花青素含量测定 | 第63-64页 |
| 1.4.4.1 原花青素含量测定 | 第63页 |
| 1.4.4.2 花青素含量测定 | 第63-64页 |
| 1.4.5 转基因拟南芥原花青素和花青素合成途径关键基因表达量测定 | 第64-65页 |
| 1.4.6 数据处理 | 第65页 |
| 2. 结果与分析 | 第65-69页 |
| 2.1 过表达载体构建 | 第65页 |
| 2.2 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第65-67页 |
| 2.2.1 目的基因重组质粒转化 | 第65-67页 |
| 2.2.2 空载质粒转化 | 第67页 |
| 2.3 拟南芥原花青素和花青素含量测定 | 第67-68页 |
| 2.4 拟南芥原花青素和花青素合成途径关键基因表达量测定 | 第68-69页 |
| 3. 讨论 | 第69-71页 |
| 七、需要进一步研究的内容 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 学习期间发表论文情况 | 第84-85页 |
