| 主要缩略词 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1.引言 | 第12-24页 |
| 1.1 研究超长链多不饱和脂肪酸目的意义 | 第12-13页 |
| 1.2 超长链不饱和脂肪酸的研究进展 | 第13-24页 |
| 1.2.1 超长链多不饱和脂肪酸的命名及分类 | 第13-14页 |
| 1.2.2 多不饱和脂肪酸的来源 | 第14-15页 |
| 1.2.3 超长链不饱和脂肪酸的生物学功能 | 第15-17页 |
| 1.2.4 超长链不饱和脂肪酸的合成通路及相关的酶 | 第17-21页 |
| 1.2.5 多不饱和脂肪酸在转基因植物中的合成 | 第21-24页 |
| 2.材料与方法 | 第24-26页 |
| 2.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.3 酶及生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.4 用到的培养基 | 第25页 |
| 2.5 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 3.实验方法 | 第26-41页 |
| 3.1 目的基因的亚克隆 | 第26-30页 |
| 3.1.1 质粒 DNA 的提取（碱法） | 第26页 |
| 3.1.2 引物设计 | 第26-27页 |
| 3.1.3 目的基因的 PCR 扩增 | 第27-28页 |
| 3.1.4 目的基因的凝胶电泳 | 第28页 |
| 3.1.5 目的基因的回收（试剂盒回收） | 第28-29页 |
| 3.1.6 目的基因与克隆载体的连接 | 第29页 |
| 3.1.7 大肠杆菌感受态的制备与转化 | 第29-30页 |
| 3.1.8 阳性菌落的筛选及鉴定 | 第30页 |
| 3.2 辅助表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 3.2.1 克隆载体阳性转化子的酶切 | 第30-31页 |
| 3.2.2 辅助表达载体的改造及构建 | 第31-34页 |
| 3.3 植物表达载体的构建及转化 | 第34-41页 |
| 3.3.1 农杆菌感受态的制备 | 第34-35页 |
| 3.3.2 农杆菌感受态的转化 | 第35页 |
| 3.3.3 农杆菌介导的拟南芥转化 | 第35-36页 |
| 3.3.4 棉花的转化 | 第36-39页 |
| 3.3.5 实时荧光定量 PCR 进行目的基因拷贝数鉴定 | 第39-41页 |
| 4.结果与分析 | 第41-72页 |
| 4.1 AA、EPA 等合成关键基因的亚克隆 | 第41-56页 |
| 4.1.1 大豆种子特异性启动子 BCSP952 的亚克隆 | 第41-44页 |
| 4.1.2 高山被孢霉△5 去饱和酶基因的亚克隆 | 第44-47页 |
| 4.1.3 小眼虫藻△8 去饱和酶基因的亚克隆 | 第47-50页 |
| 4.1.4 球等鞭金藻△9 链延长酶基因的亚克隆 | 第50-53页 |
| 4.1.5 毕赤酵母ω3 去饱和酶基因的亚克隆 | 第53-56页 |
| 4.2 辅助表达载体 PAUX2-△5ω3△8△9 的组装 | 第56-58页 |
| 4.2.1 辅助表达载体 PAUX2-△8△9 的构建 | 第56-57页 |
| 4.2.2 辅助表达载体 PAUX2-△5ω3 的构建 | 第57-58页 |
| 4.2.3 PAUX2-△5ω3△8△9 的获得 | 第58页 |
| 4.3 植物表达载体 pCamBAR-EC 的构建 | 第58-60页 |
| 4.3.1 植物表达载体 pCamBAR-△8△9 的构建 | 第58-59页 |
| 4.3.2 植物表达载体 pCamBAR-△5ω3△8△9 的构建 | 第59-60页 |
| 4.4 重组载体在拟南芥中的表达检测 | 第60-64页 |
| 4.4.1 pCamBAR-△5ω3△8△9 重组载体在拟南芥中的表达检测 | 第60-62页 |
| 4.4.2 pCamBAR-△8△9 重组载体在拟南芥中的表达检测 | 第62-64页 |
| 4.5 pCamBAR-△5ω3△8△9、pCamBAR-△8△9 重组载体对棉花的转化和检测 | 第64-72页 |
| 4.5.1 对棉花的遗传转化 | 第64-65页 |
| 4.5.2 收获种子的草甘膦抗性鉴定 | 第65页 |
| 4.5.3 抗除草剂阳性株的 PCR 检测 | 第65-67页 |
| 4.5.4 阳性植株实时荧光定量 PCR 分析 | 第67-72页 |
| 5.讨论 | 第72-77页 |
| 5.1 多基因辅助表达载体的构建及应用 | 第72-73页 |
| 5.2 转基因材料中不同 VLCPUFAs 相关基因的表达效率差异及可能原因 | 第73-75页 |
| 5.3 转化棉株中不同基因检测结果不同可能原因 | 第75-76页 |
| 5.4 影响棉花转化效率的因素 | 第76-77页 |
| 6.结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 攻读硕士学位期间发表和撰写论文情况 | 第89页 |
